| 主要英文缩写词 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 前言 | 第14-17页 |
| 第1章 H5N1流感病毒HA基因的密码子优化 | 第17-26页 |
| 第一节 材料与方法 | 第17-21页 |
| 一、 材料 | 第17-18页 |
| 1、毒株、HA基因序列和细胞 | 第17页 |
| 2、质粒和菌株 | 第17页 |
| 3、工具酶、试剂 | 第17-18页 |
| 二、 方法 | 第18-21页 |
| 1、人、小鼠和流感病毒的密码子使用频率分析 | 第18-20页 |
| 2、HA基因的密码子优化 | 第20页 |
| 3、真核表达质粒的构建及制备 | 第20页 |
| 4、真核表达质粒体外转染293T细胞 | 第20页 |
| 5、间接免疫荧光检测HA基因在细胞中的表达 | 第20-21页 |
| 6、Western Blot比较Wt.HA和Mod.HA在细胞中的表达水平 | 第21页 |
| 第二节 结果 | 第21-25页 |
| 一、密码子选用情况 | 第21-23页 |
| 二、真核表达质粒的酶切鉴定结果 | 第23-24页 |
| 三、间接免疫荧光(IFA)和Western Blot实验检测HA表达水平 | 第24-25页 |
| 第三节 小结 | 第25-26页 |
| 第2章 DNA疫苗pVR-Mod.HA的构建及制备 | 第26-34页 |
| 第一节 材料与方法 | 第26-31页 |
| 一、材料 | 第26-27页 |
| 1、质粒和菌株 | 第26页 |
| 2、工具酶、试剂 | 第26页 |
| 3、引物设计合成 | 第26-27页 |
| 二、方法 | 第27-31页 |
| 1、本研究所用到的质粒操作基本实验方法 | 第27-28页 |
| 2、克隆载体pMD18T-Mod.HA的构建 | 第28-29页 |
| 3、质粒pVR-Mod.HA的构建 | 第29页 |
| 4、DNA疫苗pVR-Mod.HA的制备 | 第29-30页 |
| 5、pVR-Mod.HA的真核瞬时表达鉴定 | 第30-31页 |
| 第二节 结果 | 第31-33页 |
| 一、质粒pVR-Mod.HA的构建 | 第31页 |
| 二、PCR及酶切鉴定结果 | 第31-32页 |
| 三、间接免疫荧光鉴定结果 | 第32-33页 |
| 第三节 小结 | 第33-34页 |
| 第3章 腺病毒载体疫苗的构建及制备 | 第34-42页 |
| 第一节 材料与方法 | 第34-39页 |
| 一、材料 | 第34-35页 |
| 1、腺病毒包装系统和细胞 | 第34页 |
| 2、质粒和菌株 | 第34-35页 |
| 3、试剂和抗体 | 第35页 |
| 二、方法 | 第35-39页 |
| 1、高质量质粒的制备 | 第35页 |
| 2、重组腺病毒及扩增纯化 | 第35-37页 |
| 3、重组腺病毒的鉴定 | 第37页 |
| 4、腺病毒滴度测定 | 第37-39页 |
| 第二节 结果 | 第39-41页 |
| 一、重组腺病毒鉴定结果 | 第39-40页 |
| 二、重组腺病毒滴度测定结果 | 第40-41页 |
| 第三节 小结 | 第41-42页 |
| 第4章 小鼠实验及免疫效果评价 | 第42-56页 |
| 第一节 材料与方法 | 第42-49页 |
| 一、材料 | 第42-43页 |
| 1、实验动物 | 第42页 |
| 2、疫苗 | 第42页 |
| 3、H5N1流感病毒和细胞 | 第42页 |
| 4、培养基、试剂和仪器 | 第42-43页 |
| 二、方法 | 第43-49页 |
| 1、小鼠免疫 | 第43-44页 |
| 2、血清和脾淋巴细胞的采集 | 第44页 |
| 3、马红细胞血凝抑制实验(HI)检测H5抗体 | 第44-45页 |
| 4、微量中和实验(MN)检测中和抗体 | 第45-47页 |
| 5、ELISPOT实验 | 第47-48页 |
| 6、流式细胞实验 | 第48-49页 |
| 第二节 结果 | 第49-54页 |
| 一、马红细胞血凝抑制实验(HI)结果 | 第49页 |
| 二、微量中和实验(MN)结果 | 第49-51页 |
| 三、HA表位筛选结果 | 第51-52页 |
| 四、ELISPOT实验结果 | 第52-53页 |
| 五、流式细胞实验结果 | 第53-54页 |
| 第三节 小结 | 第54-56页 |
| 讨论 | 第56-59页 |
| 结论 | 第59-61页 |
| 综述 | 第61-69页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 已发表论文 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
