| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-20页 |
| ·本课题研究意义 | 第9-10页 |
| ·国内外研究概况 | 第10-19页 |
| ·PACAP 分子结构、基因及进化 | 第10-12页 |
| ·PACAP 基因 | 第10页 |
| ·PACAP 分子结构与进化 | 第10-12页 |
| ·PACAP 的组织分布 | 第12-13页 |
| ·PACAP 的受体及其分布 | 第13页 |
| ·PACAP 的作用机理 | 第13-14页 |
| ·PACAP 的结构与功能的关系 | 第14页 |
| ·PACAP 生物功能 | 第14-19页 |
| ·下丘脑促垂体激素功能 | 第14-16页 |
| ·在生殖系统中的作用 | 第16-17页 |
| ·在心血管系统中的作用 | 第17页 |
| ·在消化系统中的作用 | 第17-18页 |
| ·在神经系统中的作用 | 第18页 |
| ·在免疫系统中的作用 | 第18-19页 |
| ·本课题研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 草鱼PACAP_(38)表达载体的构建及其融合蛋白的表达和纯化 | 第20-48页 |
| ·实验材料 | 第20-23页 |
| ·菌株和载体 | 第20页 |
| ·引物 | 第20页 |
| ·主要溶液配制 | 第20-22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器和设备 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-29页 |
| ·聚合酶链反应(PCR)及扩增产物的胶回收纯化 | 第23-25页 |
| ·胶回收纯化产物和载体的酶切 | 第25-26页 |
| ·回收片段连接反应 | 第26页 |
| ·E.coli 感受态的制备 | 第26页 |
| ·质粒DNA 的抽提与转化 | 第26-27页 |
| 2. 2.5.1 质粒DNA 的抽提 | 第26-27页 |
| ·转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第27-28页 |
| ·优化诱导表达条件 | 第27-28页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第28页 |
| ·Western-blot 鉴定 | 第28页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| ·pET32a(+)空载体的诱导表达与纯化 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-43页 |
| ·pThioHis A/PACAP_(38) 在Top10 中表达和纯化 | 第29-34页 |
| ·pThioHis A/PACAP_(38) 表达质粒的构建和鉴定 | 第29-32页 |
| ·pThioHis A/PACAP_(38) 质粒的诱导表达和条件优化 | 第32-34页 |
| ·Trx-PACAP_(38) 融合蛋白的纯化 | 第34页 |
| ·pThioHis A/PACAP_(38) 在BL21(DE3)中表达和纯化 | 第34-37页 |
| ·pThioHis A/PACAP_(38) 质粒的诱导表达和条件优化 | 第34-36页 |
| ·Trx-PACAP 融合蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·pET32a(+)/PACAP_(38) 在BL21(DE3)中表达和纯化 | 第37-42页 |
| ·pET32a(+)/PACAP_(38) 表达质粒的构建和鉴定 | 第37-40页 |
| ·pET32a(+)/PACAP_(38) 质粒的诱导表达和条件优化 | 第40-41页 |
| ·Trx-PACAP_(38) 融合蛋白的纯化与鉴定 | 第41-42页 |
| ·融合伴侣的表达和纯化 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-48页 |
| ·PACAP_(38) 重组质粒的构建和原核表达 | 第43-46页 |
| ·Trx-PACAP_(38) 融合蛋白的纯化 | 第46-48页 |
| 第三章 草鱼重组PACAP_(38)的生物学活性的确定 | 第48-54页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·细胞株 | 第48页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第48页 |
| ·实验仪器 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-50页 |
| ·T98G 人胶质瘤细胞的培养 | 第49页 |
| ·不同时间条件下Trx-PACAP_(38) 融合蛋白对T98G 人胶质瘤细胞增殖的影响 | 第49-50页 |
| ·不同剂量Trx-PACAP_(38) 融合蛋白对T98G 人胶质瘤细胞增殖的影响 | 第50页 |
| ·Trx-PACAP_(38) 融合蛋白的免疫中和对人胶质瘤细胞增殖的影响 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 结束语 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 攻硕期间取得的研究成果 | 第64-65页 |
