短小芽胞杆菌脂肪酶YZ02的定向进化研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-25页 |
| ·脂肪酶简介 | 第8页 |
| ·脂肪酶催化反应类型和催化机理 | 第8-9页 |
| ·脂肪酶的水解特异性 | 第9-10页 |
| ·脂肪酶的结构 | 第10-14页 |
| ·酶的定向进化 | 第14-21页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第21-23页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第23-25页 |
| 2 材料与试剂 | 第25-30页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·菌种和质粒 | 第25页 |
| ·酶与试剂 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·溶液 | 第27-30页 |
| 3 研究方法 | 第30-38页 |
| ·质粒的提取 | 第30-31页 |
| ·易错PCR 扩增反应 | 第31-32页 |
| ·高效感受态制备 | 第32-33页 |
| ·T 载体连接 | 第33页 |
| ·转化 | 第33页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第33-34页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第34页 |
| ·交错延伸重组 | 第34-35页 |
| ·短小芽胞杆菌脂肪酶的表达和分离纯化 | 第35-36页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第36页 |
| ·野生脂肪酶和突变脂肪酶的酶学性质比较 | 第36-37页 |
| ·脂肪酶结构预测和突变位点分析 | 第37-38页 |
| 4 结果与分析 | 第38-51页 |
| ·易错PCR | 第38-39页 |
| ·突变体的筛选和酶切鉴定 | 第39-41页 |
| ·突变基因的序列测定 | 第41-44页 |
| ·脂肪酶的诱导表达和分离纯化 | 第44-46页 |
| ·突变脂肪酶和野生型脂肪酶的酶学性质比较 | 第46-48页 |
| ·短小芽胞杆菌脂肪酶的结构预测 | 第48-51页 |
| 5 讨论 | 第51-55页 |
| ·定向进化策略 | 第51页 |
| ·突变率与突变库的大小 | 第51-52页 |
| ·正向突变间的叠加问题 | 第52-53页 |
| ·筛选策略 | 第53页 |
| ·突变效应 | 第53-55页 |
| 6 小结和展望 | 第55-56页 |
| ·全文小结 | 第55页 |
| ·展望 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 附录 攻读学位期间发表论文目录 | 第66页 |
