猪产毒多杀性巴氏杆菌toxA基因的克隆与PCR诊断方法的建立
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 前言 | 第9-17页 |
| 1、产毒多杀性巴氏杆菌的概述 | 第9-12页 |
| 2、猪萎缩性鼻炎研究概况 | 第12-14页 |
| 3、猪进行性萎缩性鼻炎的检测方法的研究进展 | 第14-15页 |
| 4、研究目的和意义 | 第15-17页 |
| 材料与方法 | 第17-38页 |
| 1. 试验材料 | 第17-21页 |
| ·试验病料 | 第17页 |
| ·对照病原体 | 第17页 |
| ·菌种与质粒 | 第17-18页 |
| ·试剂 | 第18页 |
| ·试验用溶液及其配制 | 第18-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2. 试验方法 | 第21-26页 |
| ·病料的采集 | 第21页 |
| ·野外菌株实验室常规分离与诊断 | 第21-22页 |
| ·引物的设计与合成 | 第22页 |
| ·PCR 反应 | 第22页 |
| ·PCR 产物的纯化回收 | 第22-23页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第23页 |
| ·重组连接反应 | 第23页 |
| ·重组连接后质粒 DNA 的转化 | 第23-24页 |
| ·克隆的筛选 | 第24页 |
| ·质粒 DNA 的小量制备──碱裂解法 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的单酶切鉴定 | 第25页 |
| ·阳性质粒的 PCR 鉴定 | 第25页 |
| ·最适退火温度的筛选 | 第25页 |
| ·特异性试验 | 第25页 |
| ·敏感性试验 | 第25页 |
| ·区域性试验 | 第25-26页 |
| 3. 序列测定及分析 | 第26-27页 |
| ·序列测定 | 第26页 |
| ·序列分析 | 第26页 |
| ·对比试验 | 第26-27页 |
| 4. 试验结果 | 第27-34页 |
| ·PCR 扩增 | 第27页 |
| ·退火温度筛选结果 | 第27-28页 |
| ·目的基因的克隆及重组质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| ·序列测定及同源性分析 | 第29-30页 |
| ·特异性试验 | 第30页 |
| ·敏感性试验 | 第30-31页 |
| ·应用试验 | 第31-32页 |
| ·本地分离 Pm 的生化试验 | 第32-33页 |
| ·实验室分型结果 | 第33-34页 |
| 5. 讨论 | 第34-37页 |
| 6. 结论 | 第37-38页 |
| 参考资料 | 第38-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 作者简介 | 第46-47页 |
| 附录(攻读学位期间发表论文目录) | 第47页 |
