| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 1 引言 | 第11-22页 |
| ·植物内生芽孢杆菌的研究进展 | 第11-16页 |
| ·植物内生细菌的定义 | 第11页 |
| ·内生芽孢杆菌在植物病害生物防治中的应用 | 第11-12页 |
| ·植物内生芽孢杆菌的生物学作用及其机制 | 第12-15页 |
| ·芽孢杆菌基因工程菌的研究进展 | 第15-16页 |
| ·Α-淀粉酶研究进展 | 第16-21页 |
| ·淀粉酶的概述 | 第16-17页 |
| ·α-淀粉酶的概述 | 第17-18页 |
| ·α-淀粉酶的性质 | 第18-20页 |
| ·表达α-淀粉酶基因工程菌研究进展 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 B.CEREUS 905、904 淀粉酶酶学性质分析 | 第22-30页 |
| ·材料与方法 | 第22-26页 |
| ·供试菌株 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·缓冲液、药剂配制 | 第22-24页 |
| ·α-淀粉酶酶活测定 | 第24页 |
| ·Native-PAGE 测定 | 第24-25页 |
| ·淀粉酶酶学性质测定 | 第25-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-29页 |
| ·两种菌株的淀粉酶检测 | 第26-27页 |
| ·pH 值对酶活力和稳定性的影响 | 第27页 |
| ·温度对酶活力和稳定性的影响 | 第27-28页 |
| ·金属离子和蛋白酶抑制剂对酶活力的影响 | 第28-29页 |
| ·小结 | 第29-30页 |
| 3 Α-淀粉酶表达载体的构建及其原核表达 | 第30-42页 |
| ·材料与方法 | 第30-36页 |
| ·细菌菌株和质粒 | 第30页 |
| ·缓冲液、药剂配制 | 第30-32页 |
| ·芽孢杆菌基因组 DNA 提取—基因组 DNA 的小量提取 | 第32页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·PCR 扩增 | 第33页 |
| ·DNA 片断的回收 | 第33页 |
| ·DNA 的限制性酶切反应及连接反应 | 第33-34页 |
| ·热激转化 E.coli 感受态细胞 | 第34页 |
| ·碱裂解法提取质粒 DNA | 第34-35页 |
| ·DNA 基因序列的测定 | 第35页 |
| ·样品的制备 | 第35页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）检测 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-41页 |
| ·目的 DNA 的制备 | 第36页 |
| ·PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·启动子的序列测定及特征分析 | 第37-39页 |
| ·表达载体的构建及其鉴定 | 第39-41页 |
| ·amy904 和amy905 基因在E.coli BL21（DE3）的诱导表达 | 第41页 |
| ·结论 | 第41-42页 |
| 4 Α-淀粉酶表达载体的构建及在蜡样芽孢杆菌中的表达 | 第42-48页 |
| ·材料与方法 | 第42-43页 |
| ·质粒向 B.cereus 的电击转化 | 第42页 |
| ·工程菌株遗传稳定性测定 | 第42页 |
| ·生长曲线绘制 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-47页 |
| ·PCR 引物的设计 | 第43页 |
| ·载体pHP14-prom 介绍 | 第43页 |
| ·表达载体启动子酶切验证与纯化 | 第43-44页 |
| ·蜡样芽孢杆菌α-淀粉酶表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·pHP14-amy904 载体的鉴定 | 第45页 |
| ·蜡样芽孢杆菌的电击转化 | 第45页 |
| ·amy904 基因的在蜡样芽孢杆菌中表达 | 第45-46页 |
| ·质粒遗传稳定性测定 | 第46页 |
| ·基因工程菌株与野生菌株生长曲线的测定 | 第46-47页 |
| ·结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 附录 | 第55-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
