甲基对硫磷降解菌的分离、鉴定及水解酶基因的克隆
| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 英文缩略词 | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第12-23页 |
| ·农药及农药的危害 | 第12-13页 |
| ·化学农药与环境污染 | 第13-14页 |
| ·微生物降解有机磷农药的研究进展 | 第14-22页 |
| ·降解有机磷农药微生物的多样性 | 第14-15页 |
| ·有机磷农药降解菌的获得与鉴定 | 第15-16页 |
| ·降解机理与代谢途径 | 第16-17页 |
| ·影响农药降解的因素 | 第17-18页 |
| ·有机磷农药水解酶基因的克隆 | 第18-19页 |
| ·有机磷降解酶的研究 | 第19-20页 |
| ·农药微生物降解的新技术和新方法 | 第20-21页 |
| ·降解有机磷农药微生物的研究趋向 | 第21-22页 |
| ·降解有机磷农药的微生物在本实验室的研究 | 第22-23页 |
| 2 实验材料与方法 | 第23-39页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第23页 |
| ·药品与试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器及设备 | 第23-24页 |
| ·培养基与试剂配置 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-39页 |
| ·菌株的分离与纯化 | 第25-26页 |
| ·形态观察与生理生化实验 | 第26页 |
| ·CTAB 法提取基因组DNA | 第26页 |
| ·16S rDNA 序列分析 | 第26-28页 |
| ·基因注册与遗传学分析 | 第28页 |
| ·四株菌对有机磷农药的降解性能测定 | 第28-30页 |
| ·气相色谱法测定甲基对硫磷的降解 | 第28页 |
| ·四株菌对甲基对硫磷的降解曲线 | 第28-29页 |
| ·菌株接种量对降解性能的影响 | 第29页 |
| ·pH 值对菌株降解性能的影响 | 第29页 |
| ·温度对菌株降解性能的影响 | 第29页 |
| ·菌株对PNP 的降解 | 第29页 |
| ·菌株对其他有机磷类农药降解性研究 | 第29-30页 |
| ·菌株质粒的提取 | 第30-31页 |
| ·碱裂解法 | 第30页 |
| ·改良TENS 法提取质粒 | 第30页 |
| ·质粒快速提取法 | 第30页 |
| ·碱法大量提取质粒DNA | 第30-31页 |
| ·菌株质粒的消除 | 第31页 |
| ·紫外线法 | 第31页 |
| ·电穿孔法 | 第31页 |
| ·变温SDS 法 | 第31页 |
| ·mpd 基因的克隆 | 第31-35页 |
| ·PCR 扩增目的片断 | 第31-32页 |
| ·DNA 片断与质粒载体的体外重组 | 第32页 |
| ·表达载体pRL439-mpd 的构建 | 第32-35页 |
| ·降解酶的初步研究 | 第35-37页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第35-37页 |
| ·四株野生型菌株MPD 水解酶的定位 | 第37-38页 |
| ·工程菌的酶活分析 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-69页 |
| ·甲基对硫磷菌株的分离鉴定 | 第39-45页 |
| ·菌株的分离鉴定 | 第39-40页 |
| ·生理生化特征 | 第40页 |
| ·四株菌16SrDNA 序列分析 | 第40-45页 |
| ·四株菌16SrDNA 同源性分析及系统发育分析 | 第45页 |
| ·降解菌对有机磷农药的降解性能测定 | 第45-55页 |
| ·气相色谱检测结果 | 第45-48页 |
| ·四株菌对甲基对硫磷的降解曲线 | 第48-49页 |
| ·菌株接种量对降解性能的影响 | 第49-50页 |
| ·pH 值对菌株降解性能的影响 | 第50-51页 |
| ·温度对菌株降解性能的影响 | 第51-52页 |
| ·四株菌对PNP 的降解 | 第52-54页 |
| ·菌株对其他有机磷类农药降解性研究 | 第54-55页 |
| ·四株野生型菌株质粒的提取 | 第55-56页 |
| ·mpd 基因的克隆 | 第56-61页 |
| ·工程菌的构建 | 第61-64页 |
| ·水解酶的初步研究 | 第64-69页 |
| ·四株野生型菌株MPD 水解酶的研究 | 第64-68页 |
| ·四株野生型菌株MPD 水解酶的定位 | 第68页 |
| ·工程菌酶活测定 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-72页 |
| ·野生型菌株与工程菌株 | 第69页 |
| ·四株菌降解MP 的途径分析 | 第69-70页 |
| ·降解酶系的可诱导性 | 第70-71页 |
| ·降解基因的定位与克隆 | 第71页 |
| ·下一步工作设想 | 第71-72页 |
| 5 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 在研究生期间发表论文 | 第84页 |
