| 英文缩略语表 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-22页 |
| 1.P450晦CYP2D6 | 第11-12页 |
| 2.CYP2D6基因多态性与基因频率分布 | 第12-14页 |
| 3.建立人的体外药物代谢模型 | 第14-21页 |
| 4.论文研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 重组人CYP2D6在酿酒酵母中的克隆、表达 | 第22-38页 |
| 1.材料 | 第22-26页 |
| 2.方法 | 第26-33页 |
| ·pYES2-CYP2D6野生株表达载体构建 | 第26-28页 |
| ·PCR引物设计 | 第26页 |
| ·总RNA的提取 | 第26页 |
| ·RT-PCR获得CYP2D6野生株cDNA | 第26-27页 |
| ·PCR产物和pYES2/CT载体的酶切 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第27-28页 |
| ·酶切产物的连接和转化 | 第28页 |
| ·重组质粒的提取及鉴定 | 第28页 |
| ·pYES2-CYP2D6突变株表达载体的构建 | 第28-31页 |
| ·PCR引物设计 | 第28-30页 |
| ·定点突变PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·构建8个pYES2-CYP突变株表达载体 | 第31页 |
| ·重组质粒在酿酒酵母中的表达 | 第31-33页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·电转化并筛选重组菌株 | 第31-32页 |
| ·酵母菌株的小量诱导表达 | 第32页 |
| ·玻璃珠研磨破碎酵母细胞 | 第32页 |
| ·Western-Blot鉴定重组蛋白的表达 | 第32-33页 |
| 3.结果 | 第33-35页 |
| 4.讨论 | 第35-38页 |
| 第三章 CYP2D6酶活性测定及其体外药物高通量筛选 | 第38-58页 |
| 1.材料 | 第38-40页 |
| 2.方法 | 第40-44页 |
| ·大量诱导表达并提取微粒体 | 第40页 |
| ·总蛋白含量的测定 | 第40页 |
| ·CYP2D6的色谱扫描 | 第40页 |
| ·酶蛋白浓度和代谢时间的条件初步优化 | 第40-41页 |
| ·CYP2D6野生株的酶动力学参数测定 | 第41-42页 |
| ·CYP2D6的8个突变株酶活性检测 | 第42页 |
| ·CYP2D6酶代谢活性特异性抑制实验 | 第42-43页 |
| ·药物抑制CYP2D6酶代谢活性检测方法的建立 | 第43-44页 |
| 3.结果 | 第44-54页 |
| 4.讨论 | 第54-58页 |
| 全文小结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 硕士期间发表论文 | 第69页 |