| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 引言 | 第9-18页 |
| ·结核病基础研究概况 | 第9-15页 |
| ·结核分枝杆菌脂肪酸合成酶 | 第9页 |
| ·包涵体的表达和纯化 | 第9-10页 |
| ·Halo-Tag 技术原理 | 第10-11页 |
| ·Halo-tag 技术的应用 | 第11页 |
| ·Halo-tag 应用的技术创新点 | 第11-12页 |
| ·靶向小分子化合物的药物筛选研究进展 | 第12-15页 |
| ·分子细胞水平的特异性体外筛选模型 | 第15页 |
| ·本研究的立题依据及意义 | 第15-18页 |
| 2 重组mtFabH 的构建及其表达与纯化 | 第18-26页 |
| ·材料与方法 | 第18-21页 |
| ·实验材料 | 第18-19页 |
| ·菌株及质粒 | 第18-19页 |
| ·试剂 | 第19页 |
| ·各溶液的配制 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-21页 |
| ·基因mtFabH 原核表达载体的构建及鉴定 | 第19-20页 |
| ·mtFabH 蛋白表达纯化及变性 | 第20-21页 |
| ·蛋白质复性 | 第21页 |
| ·镍柱纯化 His-Trx-mtFabH 蛋白 | 第21页 |
| ·结果与分析 | 第21-25页 |
| ·PCR 扩增目的片段mtFabH | 第21-22页 |
| ·重组mtFabH 的质粒鉴定 | 第22-24页 |
| ·mtFabH 重组质粒在大肠杆菌的诱导表达 | 第24-25页 |
| ·mtFabH 包涵体变复性及纯化 | 第25页 |
| ·讨论 | 第25-26页 |
| 3 重组 Halo Tag 基因的构建及其表达与纯化 | 第26-33页 |
| ·实验材料和方法 | 第26-29页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·菌株及质粒 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26页 |
| ·各溶液的配制 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-29页 |
| ·基因Halo-Tag 原核表达载体的构建及鉴定 | 第27-28页 |
| ·pGEX-Halotag 蛋白表达纯化 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-32页 |
| ·PCR 扩增目的片段Halo-Tag | 第29-32页 |
| ·Halo-Tag 重组质粒在大肠杆菌中诱导表达及纯化 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| 4 His-tag Pull-Down 对mtFabH 的靶向小分子化合物进行鉴定和筛选 | 第33-37页 |
| ·材料和方法 | 第33-35页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·蛋白质及小分子化合物材料 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33页 |
| ·缓冲溶液的配制 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-35页 |
| ·Histag-Pull-Down | 第33-35页 |
| ·实验结果 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| 5 竞争型 His-tag Pull-Down 比较mtFabH 的靶向小分子化合物活性大小 | 第37-39页 |
| ·材料和方法 | 第37-38页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·蛋白质及小分子化合物材料 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·缓冲溶液的配制 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-38页 |
| ·实验结果 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| 6 结论 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 作者简介 | 第44页 |
