| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 研究部分 | 第10-47页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 第一章 基于BAC同源重组技术构建打靶载体 | 第12-24页 |
| 摘要 | 第12页 |
| 1 引言 | 第12-13页 |
| 2 材料与方法 | 第13-17页 |
| ·材料 | 第13页 |
| ·质粒和菌株 | 第13页 |
| ·酶及主要试剂 | 第13页 |
| ·方法 | 第13-17页 |
| ·打靶载体构建流程 | 第13-14页 |
| ·引物设计与合成 | 第14-15页 |
| ·同源臂的扩增 | 第15页 |
| ·重组质粒及EGFP/Kan靶向插入片段的构建 | 第15-16页 |
| ·转化Nanog-BAC至DY380中 | 第16页 |
| ·套取Nanog启动子片段 | 第16-17页 |
| ·EGFP/Kan片段的靶向插入 | 第17页 |
| 3 结果 | 第17-19页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第17-19页 |
| ·套取NANOG启动子的鉴定 | 第19页 |
| ·EGFP/KAN片断靶向插入的鉴定 | 第19页 |
| 4 讨论 | 第19-21页 |
| 参考文献 | 第21-24页 |
| 第二章 电转ES细胞及阳性克隆的筛选 | 第24-34页 |
| 摘要 | 第24页 |
| 1 引言 | 第24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-31页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·细胞 | 第24-25页 |
| ·主要溶液 | 第25页 |
| ·溶液配制 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-31页 |
| ·胚胎成纤维细胞及饲养层细胞的制备 | 第25-27页 |
| ·小鼠胚胎干细胞的培养方法 | 第27-28页 |
| ·打靶载体质粒的大量制备 | 第28-29页 |
| ·打靶载体的线性化及纯化 | 第29-30页 |
| ·电穿孔法转染mES细胞 | 第30页 |
| ·G418富集阳性细胞 | 第30-31页 |
| ·FACS再次富集阳性细胞 | 第31页 |
| 3 结果 | 第31-32页 |
| ·FACS富集阳性细胞 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-34页 |
| 第三章 mES细胞NANOG基因报告体系的鉴定 | 第34-47页 |
| 摘要 | 第34页 |
| 1 引言 | 第34-35页 |
| 2 材料方法 | 第35-38页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·细胞 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·溶液配制 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-38页 |
| ·RT-PCR检测阳性细胞的基因表达 | 第35-36页 |
| ·阳性细胞自发分化 | 第36-37页 |
| ·免疫细胞化学检测自发分化的阳性细胞的表达模式 | 第37页 |
| ·阳性细胞EB形成 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR检测EB的基因表达 | 第38页 |
| 3 结果 | 第38-42页 |
| ·RT-PCR检测阳性细胞及其形成的EB的基因表达 | 第38-39页 |
| ·阳性细胞分化前后基因表达模式 | 第39-41页 |
| ·阳性细胞及R1细胞EB形成 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 小结 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-47页 |
| 综述部分 | 第47-67页 |
| 第四章 小鼠胚胎干细胞多能性的维持及分化的分子机制 | 第47-59页 |
| 1 相关信号通路 | 第47-50页 |
| ·LIF/Ge130/STAT3信号通路维持MES细胞多能性 | 第47-48页 |
| ·WNT信号通路维持MES细胞多能性 | 第48页 |
| ·BMPs/SMADS信号通路的抑制维持MES细胞多能性 | 第48-49页 |
| ·P13K信号通路促进MES细胞的自我更新 | 第49-50页 |
| 2 相关细胞因子 | 第50-55页 |
| ·OCT4维持ES细胞多能性 | 第50-51页 |
| ·SOX2维持ES细胞多能性 | 第51页 |
| ·NANOG维持ES细胞多能性 | 第51-55页 |
| ·Nanog基因 | 第51页 |
| ·Nanog的表达模式 | 第51-52页 |
| ·Nanog过表达及Nanog干扰和敲除 | 第52-53页 |
| ·Nanog在维持ES细胞多能性的分子机制 | 第53页 |
| ·Nanog与其他多能性维持因子及信号通路的关系 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 第五章 基因打靶技术 | 第59-67页 |
| 1 基因打靶技术的原理 | 第59-60页 |
| 2 基因打靶技术的步骤 | 第60-62页 |
| ·打靶载体的构建 | 第60页 |
| ·转化受体细胞 | 第60-61页 |
| ·阳性细胞筛选和鉴定 | 第61页 |
| ·问题及展望 | 第61-62页 |
| 3 基于BAC的同源重组 | 第62-65页 |
| ·基于BAC的同源重组原理 | 第62-63页 |
| ·步骤 | 第63-64页 |
| ·应用和前景 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-67页 |
| 发表论文 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
