缩略语中英文对照表 | 第1-14页 |
中文摘要 | 第14-17页 |
英文摘要 | 第17-21页 |
第一章 绪论 | 第21-39页 |
第一节 海洋鱼类抗菌肽研究进展 | 第22-30页 |
第二节 Hepcidin研究进展 | 第30-37页 |
第三节 本研究的技术路线、目的和意义 | 第37-39页 |
第二章 真鲷鳃cDNA文库的构建及hepcidin基因的扩增 | 第39-52页 |
第一节 材料与方法 | 第39-47页 |
·材料 | 第39-42页 |
·实验方法 | 第42-47页 |
第二节 结果 | 第47-50页 |
·总RNA的提取和Poly(A) mRNA分离 | 第47-48页 |
·消化后的双链DNA | 第48页 |
·文库滴度和容量测定 | 第48页 |
·cDNA文库插入片段的随机测定 | 第48-50页 |
·hepcidin基因的扩增及序列分析 | 第50页 |
第三节 讨论 | 第50-52页 |
第三章 养殖真鲷、黑鲷不同器官、组织hepcidin 基因的克隆与序列分析 | 第52-81页 |
第一节 材料与方法 | 第52-64页 |
·材料 | 第52-55页 |
·实验方法 | 第55-64页 |
第二节 结果 | 第64-74页 |
·总RNA提取 | 第64页 |
·RT-PCR结果 | 第64-66页 |
·真鲷3′RACE和5′RACE结果 | 第66-69页 |
·黑鲷3′RACE 结果 | 第69-71页 |
·真鲷、黑鲷多器官、组织扩增的hepcidin cDNA 推导的氨基酸序列分析 | 第71-74页 |
·推导的真鲷、黑鲷hepcidin氨基酸序列与其它已知hepcidin的比较 | 第74页 |
第三节 讨论 | 第74-81页 |
·RACE技术的应用 | 第74-77页 |
·推导的真鲷、黑鲷氨基酸序列 | 第77-78页 |
·真鲷、黑鲷多条hepcidin 序列的获得 | 第78-79页 |
·hepcidin 的功能 | 第79-81页 |
第四章 真鲷、黑鲷hepcidin基因组DNA扩增及上游调控元件分析 | 第81-97页 |
第一节 材料与方法 | 第81-87页 |
·材料 | 第81-82页 |
·实验方法 | 第82-87页 |
第二节 结果 | 第87-92页 |
·基因组提取及hepcidin DNA片段的扩增 | 第87页 |
·真鲷基因组hepcidin 上下游片段的扩增及序列分析 | 第87-90页 |
·黑鲷基因组hepcidin 侧翼片段的扩增及序列分析 | 第90-92页 |
第三节 讨论 | 第92-97页 |
·连接头特异扩增及反向PCR 扩增的应用 | 第92-94页 |
·基因变体对应的多条hepcidin DNA 序列的获得 | 第94-95页 |
·上游调控序列的分析 | 第95-97页 |
第五章 hepcidin基因和基因变体在黑鲷不同发育阶段及诱导条件下多器官、组织中的表达特性 | 第97-122页 |
第一节 材料与方法 | 第97-104页 |
·材料 | 第97-99页 |
·实验方法 | 第99-104页 |
第二节 结果 | 第104-118页 |
·总RNA提取 | 第104-108页 |
·杂交用探针长度及杂交温度 | 第108页 |
·探针浓度的测定 | 第108-110页 |
·RT-PCR 检测黑鲷幼鱼多器官、组织中hepcidin 的表达 | 第110页 |
·斑点杂交检测黑鲷幼鱼和成鱼多器官、组织中hepcidin 的表达 | 第110-113页 |
·细菌感染后黑鲷幼鱼多器官、组织中hepcidin 的表达 | 第113-117页 |
·右旋糖酐铁注射黑鲷幼鱼多器官、组织中hepcidin 的表达 | 第117-118页 |
第三节 讨论 | 第118-122页 |
·Dot-blot 与 Northern-blot | 第118-119页 |
·hepcidin 的器官、组织特异性表达 | 第119-120页 |
·细菌感染和铁过量对hepcidin 的诱导 | 第120-122页 |
第六章 hepcidin 的原核表达、抗菌活性测定及抗体制备 | 第122-148页 |
第一节 材料与方法 | 第122-135页 |
·材料 | 第122-127页 |
·实验方法 | 第127-135页 |
第二节 结果 | 第135-145页 |
·预连接pTrc-CKS 表达载体和hepcidin2 目的cDNA 片段的制备 | 第135-136页 |
·pTrc-CKS/hepcidin2 表达载体的鉴定及测序 | 第136-138页 |
·pTrc-CKS/hepcidin2 重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第138-139页 |
·hepcidin2 融合表达产物的纯化及 Western-blot 鉴定 | 第139-141页 |
·纯化表达产物的脱盐及酶切 | 第141-142页 |
·hepcidin 原核表达蛋白抗菌活性的测定 | 第142-144页 |
·表达蛋白抗血清效价的测定 | 第144-145页 |
第三节 讨论 | 第145-148页 |
·pTrc-CKS 融合表达载体的选择 | 第145页 |
·hepcidin 融合表达产物的诱导及纯化 | 第145-146页 |
·hepcidin 抗菌活性的相关研究 | 第146-147页 |
·hepcidin 体外表达的相关研究 | 第147-148页 |
结语 | 第148-151页 |
参考文献 | 第151-162页 |
在学期间参加的科研项目及成果 | 第162-164页 |
致谢 | 第164页 |