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养殖真鲷、黑鲷抗菌肽hepcidin的基因克隆、表达特性及其抗菌活性研究

缩略语中英文对照表第1-14页
中文摘要第14-17页
英文摘要第17-21页
第一章 绪论第21-39页
 第一节 海洋鱼类抗菌肽研究进展第22-30页
 第二节 Hepcidin研究进展第30-37页
 第三节 本研究的技术路线、目的和意义第37-39页
第二章 真鲷鳃cDNA文库的构建及hepcidin基因的扩增第39-52页
 第一节 材料与方法第39-47页
   ·材料第39-42页
   ·实验方法第42-47页
 第二节 结果第47-50页
   ·总RNA的提取和Poly(A) mRNA分离第47-48页
   ·消化后的双链DNA第48页
   ·文库滴度和容量测定第48页
   ·cDNA文库插入片段的随机测定第48-50页
   ·hepcidin基因的扩增及序列分析第50页
 第三节 讨论第50-52页
第三章 养殖真鲷、黑鲷不同器官、组织hepcidin 基因的克隆与序列分析第52-81页
 第一节 材料与方法第52-64页
   ·材料第52-55页
   ·实验方法第55-64页
 第二节 结果第64-74页
   ·总RNA提取第64页
   ·RT-PCR结果第64-66页
   ·真鲷3′RACE和5′RACE结果第66-69页
   ·黑鲷3′RACE 结果第69-71页
   ·真鲷、黑鲷多器官、组织扩增的hepcidin cDNA 推导的氨基酸序列分析第71-74页
   ·推导的真鲷、黑鲷hepcidin氨基酸序列与其它已知hepcidin的比较第74页
 第三节 讨论第74-81页
   ·RACE技术的应用第74-77页
   ·推导的真鲷、黑鲷氨基酸序列第77-78页
   ·真鲷、黑鲷多条hepcidin 序列的获得第78-79页
   ·hepcidin 的功能第79-81页
第四章 真鲷、黑鲷hepcidin基因组DNA扩增及上游调控元件分析第81-97页
 第一节 材料与方法第81-87页
   ·材料第81-82页
   ·实验方法第82-87页
 第二节 结果第87-92页
   ·基因组提取及hepcidin DNA片段的扩增第87页
   ·真鲷基因组hepcidin 上下游片段的扩增及序列分析第87-90页
   ·黑鲷基因组hepcidin 侧翼片段的扩增及序列分析第90-92页
 第三节 讨论第92-97页
   ·连接头特异扩增及反向PCR 扩增的应用第92-94页
   ·基因变体对应的多条hepcidin DNA 序列的获得第94-95页
   ·上游调控序列的分析第95-97页
第五章 hepcidin基因和基因变体在黑鲷不同发育阶段及诱导条件下多器官、组织中的表达特性第97-122页
 第一节 材料与方法第97-104页
   ·材料第97-99页
   ·实验方法第99-104页
 第二节 结果第104-118页
   ·总RNA提取第104-108页
   ·杂交用探针长度及杂交温度第108页
   ·探针浓度的测定第108-110页
   ·RT-PCR 检测黑鲷幼鱼多器官、组织中hepcidin 的表达第110页
   ·斑点杂交检测黑鲷幼鱼和成鱼多器官、组织中hepcidin 的表达第110-113页
   ·细菌感染后黑鲷幼鱼多器官、组织中hepcidin 的表达第113-117页
   ·右旋糖酐铁注射黑鲷幼鱼多器官、组织中hepcidin 的表达第117-118页
 第三节 讨论第118-122页
   ·Dot-blot 与 Northern-blot第118-119页
   ·hepcidin 的器官、组织特异性表达第119-120页
   ·细菌感染和铁过量对hepcidin 的诱导第120-122页
第六章 hepcidin 的原核表达、抗菌活性测定及抗体制备第122-148页
 第一节 材料与方法第122-135页
   ·材料第122-127页
   ·实验方法第127-135页
 第二节 结果第135-145页
   ·预连接pTrc-CKS 表达载体和hepcidin2 目的cDNA 片段的制备第135-136页
   ·pTrc-CKS/hepcidin2 表达载体的鉴定及测序第136-138页
   ·pTrc-CKS/hepcidin2 重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达第138-139页
   ·hepcidin2 融合表达产物的纯化及 Western-blot 鉴定第139-141页
   ·纯化表达产物的脱盐及酶切第141-142页
   ·hepcidin 原核表达蛋白抗菌活性的测定第142-144页
   ·表达蛋白抗血清效价的测定第144-145页
 第三节 讨论第145-148页
   ·pTrc-CKS 融合表达载体的选择第145页
   ·hepcidin 融合表达产物的诱导及纯化第145-146页
   ·hepcidin 抗菌活性的相关研究第146-147页
   ·hepcidin 体外表达的相关研究第147-148页
结语第148-151页
参考文献第151-162页
在学期间参加的科研项目及成果第162-164页
致谢第164页

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