| 第一章 综述 | 第1-16页 |
| ·前言 | 第9页 |
| ·甲基利用菌简介 | 第9-12页 |
| ·甲基利用菌研究进展 | 第12-14页 |
| ·本课题研究内容和目的 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-34页 |
| ·材料 | 第16-20页 |
| ·菌株及质粒 | 第16-17页 |
| ·培养基 | 第17-18页 |
| ·生长条件 | 第18-19页 |
| ·菌种保存 | 第19页 |
| ·抗生素 | 第19-20页 |
| ·溶液、缓冲液和试剂 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-34页 |
| ·常规PCR反应 | 第20-22页 |
| ·电泳 | 第22页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第22-24页 |
| ·DNA的限制性内切酶酶切 | 第24页 |
| ·DNA酶切片段的分离与回收 | 第24-25页 |
| ·DNA的连接 | 第25-26页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第26-27页 |
| ·细菌总DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·DNA—DNA杂交 | 第28-31页 |
| ·三亲本接合(triparental conjugation) | 第31页 |
| ·突变体的功能互补 | 第31页 |
| ·表达菌体的构建 | 第31页 |
| ·菌株生长情况的分析 | 第31-32页 |
| ·丝氨酸乙醛酸氨基转移酶活性检测 | 第32页 |
| ·Bradford蛋白浓度测定方法 | 第32-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-52页 |
| ·MB200丝氨酸乙醛酸氨基转移酶基因(sga)的克隆 | 第34-37页 |
| ·MB200 sga基因的克隆 | 第34-35页 |
| ·sga和pGEM-T Easy的连接与转化 | 第35-36页 |
| ·测序结果及比较 | 第36-37页 |
| ·MB200 sga基因突变体的构建 | 第37-43页 |
| ·MB200 sga基因部分片段(ps)的克隆 | 第39页 |
| ·ps和pGEM-T Easy的连接与转化 | 第39-40页 |
| ·重组质粒pK18mob-ps的构建 | 第40页 |
| ·重组质粒pK18mob-ps连接正反向验证 | 第40-41页 |
| ·三亲本结合 | 第41页 |
| ·sga基因突变菌株的验证 | 第41-43页 |
| ·互补菌株MB200s和重组菌株MB200sga的构建 | 第43-48页 |
| ·sga基因的克隆 | 第43-44页 |
| ·sga与PK18mob连接和转化 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pK18mob-sga连接正反向验证 | 第45页 |
| ·重组质粒pLAFRJ—sga的构建 | 第45-46页 |
| ·三亲本结合 | 第46页 |
| ·互补菌株MB200s和重组菌株MB200sga的验证 | 第46-48页 |
| ·菌株生长情况分析 | 第48-50页 |
| ·菌株在不同碳源培养基中的生长情况 | 第48-49页 |
| ·测定菌株生长曲线 | 第49-50页 |
| ·菌株SGAT酶活测定 | 第50-52页 |
| 第四章 讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第62页 |
