| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1.文献综述 | 第10-46页 |
| ·鱼腥监细菌PCC 7120的氮代谢和缺氮胁迫 | 第10-13页 |
| ·鱼腥蓝细菌PCC 7120的特点 | 第10-11页 |
| ·鱼腥蓝细菌PCC 7120的氮代谢和氮胁迫 | 第11-13页 |
| ·NtcA蛋白的调控作用 | 第13-25页 |
| ·异形胞发育信号分子的可能受体—NtcA蛋白 | 第13-15页 |
| ·NtcA蛋白的特点 | 第15-16页 |
| ·NtcA蛋白对目标基因的调控作刚 | 第16-24页 |
| ·ntcA基冈与herR基因之间的相互作用 | 第24-25页 |
| ·蛋白激酶信号转导系统 | 第25-33页 |
| ·真核类蛋白激酶系统 | 第26-27页 |
| ·双组分蛋白激酶系统 | 第27-30页 |
| ·真核类蛋白激酶系统与双组分蛋白激酶系统的偶联 | 第30-31页 |
| ·一种新型蛋白激酶信号转导系统 | 第31-33页 |
| ·铁代谢 | 第33-42页 |
| ·细胞对铁的吸收和转运 | 第33-37页 |
| ·细胞对铁的储存 | 第37-38页 |
| ·铁胁迫 | 第38-42页 |
| ·氧化胁迫 | 第42-45页 |
| ·过氧化物歧化酶和过氧化氢酶 | 第42-43页 |
| ·氧化胁迫转录调控子 | 第43-44页 |
| ·蓝细菌氧化胁迫适应系统 | 第44-45页 |
| ·研究的目的和意义 | 第45-46页 |
| 2. 材料和方法 | 第46-64页 |
| ·菌株和质粒 | 第46页 |
| ·培养基配方以及培养条件 | 第46-47页 |
| ·常用贮存液和缓冲液配方 | 第47-49页 |
| ·贮存液 | 第47-48页 |
| ·缓冲液 | 第48-49页 |
| ·主要的分子生物学试剂 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-64页 |
| ·鱼腥蓝细菌PCC 7120总DNA的抽提 | 第49-50页 |
| ·质粒DNA的制备及其基本操作 | 第50-51页 |
| ·转化 | 第51-53页 |
| ·鱼腥蓝细菌PCC 7120中蛋白质的制备和定量 | 第53页 |
| ·Western Blotting | 第53-55页 |
| ·蛋白质的表达和蛋白质的纯化 | 第55-59页 |
| ·细胞内铁含量的测定 | 第59页 |
| ·RNA的提取和纯化 | 第59-60页 |
| ·二维电泳实验 | 第60-64页 |
| 3.结果与分析 | 第64-111页 |
| ·pkn41和pkn42基因的结构 | 第64-65页 |
| ·RNA DotBlot和RT-PCR验证pkn41和pkn42基因的表达 | 第65-73页 |
| ·RNA Dot Blot验证pkn41和pkn42基因的表达 | 第65-66页 |
| ·RT-PCR验证pkn41和pkn42基因的表达 | 第66-70页 |
| ·Ppkn41-gfP融合表达质粒的构建 | 第70-72页 |
| ·pkn41和pkn42基因在缺铁条件下共转录 | 第72-73页 |
| ·pkn41和pkn42基因单突变体的构建 | 第73-75页 |
| ·鱼腥蓝细菌PCC 7120pkn41基因单突变体的构建 | 第73-74页 |
| ·鱼腥蓝细菌PCC 7120pkn42基因单突变体的构建 | 第74页 |
| ·突变体菌株的鉴定(Southern Blot) | 第74-75页 |
| ·pkn41和pkn42基因双突变体的构建 | 第75-78页 |
| ·双突变体的构建 | 第75-76页 |
| ·酶切验证质粒pRLDMl2Ω | 第76-77页 |
| ·突变体菌株的验证 | 第77-78页 |
| ·pkn41和pkn42基因突变体表型分析 | 第78-89页 |
| ·突变体生长曲线分析 | 第78-80页 |
| ·突变体菌株对铁螯合剂2,2-dipyridyl的敏感性 | 第80-81页 |
| ·RT-PCR验证突变体菌株的表型 | 第81-84页 |
| ·ICD酶活的测定 | 第84-85页 |
| ·突变体细胞内过氧化氢酶活性的测定 | 第85-86页 |
| ·突变体细胞内铁含量的测定 | 第86-87页 |
| ·培养基中Siderophore活性的测定 | 第87-88页 |
| ·突变体细胞色素蛋白含量的测定 | 第88-89页 |
| ·突变体互补实验 | 第89-96页 |
| ·质粒的构建 | 第89-94页 |
| ·三亲本杂交 | 第94页 |
| ·突变体互补菌株的验证 | 第94-95页 |
| ·突变体互补菌株表型分析 | 第95-96页 |
| ·重组NtcA蛋白的诱导和纯化 | 第96-98页 |
| ·确定在大肠杆菌中重组NtcA蛋白的最佳诱导时间 | 第96页 |
| ·重组NtcA蛋白的诱导 | 第96-97页 |
| ·重组NtcA蛋白的纯化 | 第97-98页 |
| ·EMSA实验体外验证NtcA蛋白与pkn41基因启动子间的相互作用 | 第98-104页 |
| ·利用PCR技术体外扩增pkn41和glnA基因的启动子区段 | 第98-99页 |
| ·大肠杆菌细胞提取液与DNA片段之间的相互作用 | 第99-101页 |
| ·纯化重组NtcA蛋白与pkn41基因启动子区域的相互作用 | 第101-103页 |
| ·放射性同位素标记的pkn41基因启动子DNA片段与NtcA蛋白的相互作用 | 第103-104页 |
| ·检测pkn41和pkn42基因在ntcA突变体中的表达 | 第104-108页 |
| ·RT-PCR验证pkn41和pkn42基因在ntcA突变体中表达 | 第104-106页 |
| ·Real-time PCR验证pkn41和pkn42基因在ntcA突变体中表达 | 第106-108页 |
| ·二维电泳分析突变体菌株和野生型菌株基因在缺铁条件下的差异性表达 | 第108-110页 |
| ·Western Blot验证NtcA蛋白在不同条件下的表达 | 第110-111页 |
| ·讨论与总结 | 第111-117页 |
| 参考文献 | 第117-141页 |
| 致谢 | 第141页 |
