| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 一、前言 | 第11-16页 |
| 1 奎尼酸在医药工业中的应用 | 第11-12页 |
| 2 奎尼酸在食品工业中的应用 | 第12页 |
| 3 奎尼酸在其他工业中的应用 | 第12-16页 |
| 二、材料与方法 | 第16-32页 |
| 1 菌株和质粒 | 第16页 |
| 2 培养基和抗生素 | 第16页 |
| 3 仪器 | 第16-17页 |
| 4 琼脂糖DNA凝胶回收试剂盒 | 第17页 |
| 5 质粒小量提取试剂盒 | 第17页 |
| 6 重组质粒pBV220-aroB的构建及鉴定 | 第17-24页 |
| ·实验材料 | 第17-18页 |
| ·E.coli 31884菌种的复苏培养 | 第18页 |
| ·E.coli 31884总DNA的提取 | 第18页 |
| ·PCR引物设计与合成 | 第18-19页 |
| ·PCR反应条件的建立 | 第19页 |
| ·PCR产物与pBV-220的连接 | 第19-21页 |
| ·质粒转化 | 第21页 |
| ·质粒提取 | 第21-22页 |
| ·阳性重组子DNA酶切鉴定 | 第22页 |
| ·重组子pBV220-aroB DNA序列分析 | 第22-23页 |
| ·重组子pBV220-aroB诱导表达产物的分析 | 第23-24页 |
| 7.重组质粒pBV220-aroE的构建及鉴定 | 第24-26页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·E.coli 31884菌种的复苏培养 | 第24页 |
| ·E.coli 31884总DNA的提取 | 第24页 |
| ·PCR引物设计与合成 | 第24页 |
| ·PCR反应条件的建立 | 第24-25页 |
| ·PCR产物与pBV-220的连接 | 第25页 |
| ·质粒转化 | 第25页 |
| ·质粒提取 | 第25页 |
| ·重组子DNA酶切鉴定 | 第25页 |
| ·重组子pBV220-aroE DNA序列分析 | 第25页 |
| ·重组子pBV220-aroE诱导表达产物的分析 | 第25-26页 |
| ·粗酶液的提取 | 第26页 |
| ·aroE酶活性的测定 | 第26页 |
| 8 重组质粒pBV220-aroF~m的构建及鉴定 | 第26-29页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·E.coli 31884菌种的复苏培养 | 第26页 |
| ·E.coli 31884总DNA的提取 | 第26页 |
| ·PCR引物设计与合成 | 第26-27页 |
| ·PCR反应条件的建立 | 第27-28页 |
| ·aroF~mPCR产物与pBV-220的连接 | 第28页 |
| ·质粒转化 | 第28页 |
| ·质粒提取 | 第28页 |
| ·重组子DNA酶切鉴定 | 第28页 |
| ·重组子pBV220-aroF~m DNA序列分析 | 第28页 |
| ·重组子pBV220-aroF~m诱导表达产物的分析 | 第28页 |
| ·粗酶液的提取 | 第28页 |
| ·aroFm生物学活性测定 | 第28-29页 |
| 9 aroE和aroF~m串联表达重组子的构建 | 第29-32页 |
| ·pBV220-aroE和pBV220-aroF~m EcoR Ⅰ／BamH Ⅰ双酶切 | 第29页 |
| ·pBV220-aroE和pBV220-aroF~m BamH Ⅰ单酶切后5′端去磷酸化反应 | 第29-30页 |
| ·P_L-aroE和pBV220-aroF~m,P_L-aroF~m和pBV220-aroE连接 | 第30-31页 |
| ·质粒转化 | 第31页 |
| ·质粒提取 | 第31页 |
| ·重组子PEF-Ⅰ、PEF-Ⅱ、PFE-Ⅰ和PFE-Ⅱ DNA酶切鉴定 | 第31页 |
| ·aroE和aroF~m串联表达重组子诱导表达产物分析 | 第31页 |
| ·粗酶液的提取 | 第31页 |
| ·aroE和aroF~m串联重组子中aroE和aroF~m生物学活性测定 | 第31-32页 |
| 三、实验结果 | 第32-42页 |
| 1 AroB基因的克隆表达 | 第32-34页 |
| ·AroB基因的PCR扩增 | 第32页 |
| ·aroB基因克隆的构建及鉴定 | 第32-33页 |
| ·aroB基因的序列测定 | 第33-34页 |
| 2 aroE基因的克隆于表达 | 第34-36页 |
| ·aroE基因的PCR扩增 | 第34页 |
| ·aroE基因克隆的构建及鉴定 | 第34-35页 |
| ·aroE基因的序列测定 | 第35页 |
| ·表达重组质粒pBV-aroE的热诱导表达 | 第35-36页 |
| ·aroE酶活的测定 | 第36页 |
| 3 aroF~m基因的克隆于表达 | 第36-39页 |
| ·aroF~m基因的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·aroF~m基因克隆的构建及鉴定 | 第37-38页 |
| ·aroF~m基因的序列测定 | 第38-39页 |
| ·aroF~m酶活的测定 | 第39页 |
| 4 aroE和aroF~m串联表达重组子的构建 | 第39-42页 |
| ·aroE和aroF~m串联表达重组子的构建 | 第39-40页 |
| ·aroE和aroF~m串联表达重组子的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·aroE和aroF~m串联表达重组子蛋白表达的SDS-PAGE分析 | 第41页 |
| ·串联表达重组子中aroE和aroF~m的酶活性测定 | 第41-42页 |
| 讨论 | 第42-43页 |
| 小结和研究展望 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 缩略语 | 第47-48页 |
| 已发表的研究论文 | 第48-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
