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中间球海胆与光棘球海胆的杂交及分子遗传学研究

摘 要第1-7页
Abstract第7-14页
第一章 文献综述第14-50页
 1 海胆研究历史概述第15-17页
 2 海胆杂交研究现状第17-19页
 3 杂交育种的分子遗传学研究第19-48页
   ·分子标记的发展和应用第20-30页
     ·同工酶标记(Allozyme markers)第22-23页
     ·线粒体DNA标记(Mitochondrial DNA markers)第23-24页
     ·RFLP标记(Restriction fragment length polymorphism)第24-25页
     ·RAPD (Random amplified polymorphic DNA)第25-26页
     ·AFLP(Amplified fragment length polymorphism)标记第26-27页
     ·SSR(Single sequence repeats)标记第27-28页
     ·SNP (Single nucleotide polymorphism) 标记第28-29页
     ·ESTs(Expressed sequence tags)标记第29-30页
   ·遗传连锁图谱及其应用第30-36页
     ·基因作图的主要种类第30-31页
     ·构建遗传连锁图的方法第31-32页
     ·遗传连锁图的应用第32-34页
     ·水产生物的遗传连锁图研究现状第34-36页
   ·分子标记在杂种优势预测中的应用第36-41页
     ·杂交育种的遗传学原理与方法第36页
     ·杂种优势的遗传学基础第36-38页
     ·分子标记预测杂种优势第38-41页
   ·基因克隆及表达差异的研究第41-48页
     ·基因克隆常用的方法第41-44页
     ·基因表达差异的分析第44-48页
 4 本研究的目的和意义第48-50页
第二章 中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)×光棘球海胆(S.nudus)杂交种的分子鉴定及生物学性状特征第50-70页
 第一节 利用微卫星标记对中间球海胆×光棘球海胆杂交种的鉴定第50-56页
  0 引言第50-51页
  1 材料与方法第51-52页
   ·实验材料第51页
   ·微卫星引物筛选第51页
   ·DNA 提取及 PCR 检测第51-52页
  2 实验结果第52-53页
  3 讨论第53-56页
   ·微卫星标记鉴定杂种的意义第53-54页
   ·微卫星引物的筛选第54页
   ·微卫星标记鉴定杂交种的应用前景第54-56页
 第二节 中间球海胆×光棘球海胆 F_1代的生物学性状特征第56-70页
  0 引言第56-57页
  1. 材料和方法第57-58页
   ·材料第57页
     ·材料来源第57页
     ·取样及测量方法第57页
   ·数据统计方法第57-58页
  2 结果第58-65页
   ·杂交海胆的外部形态特征第58-59页
   ·杂交海胆的生殖腺色泽表现第59-61页
   ·杂交海胆的生长表现第61-65页
     ·正交(IN♀×NU♂)F_1代不同时期的生长表现第61-64页
     ·正交(IN♀×NU♂)F_1代的超亲优势第64页
     ·反交(NU♀×IN♂)F_1代的生长表现第64-65页
  3 讨论第65-69页
   ·正交海胆材料的选取和取样时间的确定第65-66页
   ·正交组与对照组外部特征及生殖腺色泽第66-67页
   ·正交组与对照组生长表现第67-68页
     ·主要数量性状的测量标准第67页
     ·正交组与对照组数量性状的差异第67-68页
     ·正交杂种的超母本优势第68页
   ·正反交F_1代的生物学性状差异第68-69页
  4 小结第69-70页
第三章 杂交海胆(中间球海胆♀×光棘球海胆♂)群体遗传多样性的 AFLP 分析及AFLP 标记与数量性状的相关性分析第70-94页
 第一节 中间球海胆、光棘球海胆及杂交 F_1代(中间球海胆♀×光棘球海胆♂)群体的AFLP分析第70-80页
  0 引言第70-71页
  1 材料与方法第71-73页
   ·实验材料第71页
   ·DNA 提取第71页
   ·AFLP分析第71-72页
   ·数据的处理与分析第72-73页
  2 实验结果第73-75页
   ·中间球海胆、光棘球海胆及其杂交 F_1代 AFLP 扩增谱带统计第73-74页
   ·三个群体的遗传结构及遗传多样性分析第74-75页
   ·聚类分析第75页
  3 讨论第75-80页
   ·群体遗传多样性分析参数的选取第77页
   ·亲本数目对杂交子代群体结构的影响第77-78页
   ·子代群体的遗传组成及其与两亲本的遗传关系第78页
   ·海胆杂交对育种及生态研究的意义第78-80页
 第二节 杂交海胆(中间球海胆 Strongylocentrotus intermedius♀×光海棘球胆Strongylocentrotus nudus♂)的数量性状与AFLP 标记的相关性分析第80-94页
  0 引言第80-81页
  1 材料与方法第81-82页
   ·材料第81页
   ·DNA 提取第81页
   ·AFLP分析第81-82页
   ·数据处理第82页
     ·分组方法第82页
     ·单因素方差分析(ANOVA)第82页
  2 结果第82-90页
   ·杂交海胆的一些主要的数量性状表型分析与变异第82-83页
   ·杂交海胆群体的AFLP分析第83页
   ·单因子方差分析法(ANOVA)检测与数量性状相关联的 AFLP 标记第83-89页
     ·与杂交海胆生殖腺重相关的标记第84-85页
     ·与杂交海胆壳径相关的标记第85-86页
     ·与海胆体重相关的标记第86-88页
     ·与海胆棘长相关的标记第88-89页
   ·位点一致性的比较第89-90页
  3 讨论第90-92页
   ·标记与性状关联分析的方法及意义第90页
   ·QTL 的多效性和互作第90-92页
  4 小结第92-94页
第四章 光棘球海胆与中间球海胆遗传连锁图谱的构建第94-110页
 0 引言第94-95页
 1 材料和方法第95-98页
   ·作图群体第95页
   ·DNA 提取及AFLP分析第95-96页
   ·分离比分析第96页
   ·图谱构建第96-97页
   ·图谱的长度及覆盖率第97页
   ·AFLP标记的分布第97-98页
 2 结果第98-104页
   ·多态性水平第98-99页
   ·分离比分析第99-100页
   ·连锁图构建第100-104页
   ·图谱长度和覆盖率第104页
   ·AFLP 标记的分布第104页
 3 讨论第104-108页
   ·AFLP 标记的多态性水平第104-105页
   ·偏分离第105-106页
   ·光棘球海胆和中间球海胆的遗传连锁图第106页
   ·图谱长度和覆盖率第106页
   ·AFLP标记的分布第106-107页
   ·AFLPs 在海胆育种上的应用第107-108页
 4 小结第108-110页
第五章 杂交海胆 MYP 基因转录表达差异的研究第110-134页
 第一节 光棘球海胆的MYP 基因的cDNA 序列分析第112-122页
  0 引言第112-113页
  1 材料与方法第113-115页
   ·RNA 的提取第113页
   ·RT-PCR 反应第113页
   ·LA PCR 扩增及 PCR 产物回收第113-114页
   ·cDNA 测序及分析第114页
   ·MYP 进化分析第114-115页
  2 结果第115-120页
   ·产物检测第115页
   ·光棘球海胆MYPcDNA 核苷酸及推导氨基酸全序列第115-117页
   ·光棘球海胆与其他海胆MYP 氨基酸序列差异第117-118页
   ·光棘球海胆 MYP 与铁输送蛋白保守结构域第118-119页
   ·系统进化分析第119-120页
  3 讨论第120-122页
   ·光棘球海胆与其他海胆的分类地位第120页
   ·光棘球海胆主要卵黄蛋白基因的特点及功能第120-122页
 第二节 MYP基因在中间球海胆及杂交海胆(S.intermedius♀×S.nudus♂)生殖腺不同发育时期的转录表达差异第122-134页
  0 引言第122-123页
  1 材料和方法第123-125页
   ·材料第123页
   ·方法第123-125页
     ·不同生殖腺发育期的鉴别第123页
     ·RNA的提取第123页
     ·引物设计和筛选第123-124页
     ·RT-PCR第124页
     ·Real Time RT-PCR第124页
     ·MYP表达的相对浓度的计算第124-125页
  2 结果第125-130页
   ·雌雄生殖腺的鉴定及分期第125-128页
   ·RT-PCR的半定量结果第128-129页
   ·实时荧光定量PCR的结果第129-130页
  3 讨论第130-134页
   ·杂交海胆的生殖腺分期第130-131页
   ·RT-PCR 条件的优化第131-132页
   ·杂交海胆与中间球海胆MYP基因的表达第132页
   ·基因表达差异与杂种优势第132-134页
第六章 总结与展望第134-135页
主要参考文献第135-155页
已接收和整理的第一作者文章第155-156页
致谢第156页

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