| 第一章 文献综述 | 第1-19页 |
| 第一节 病毒诱导的基因沉默及其在植物功能基因组学研究中的应用 | 第8-17页 |
| 1 VIGS的发现 | 第8-9页 |
| 1．1 RNA介导的病毒抗性(RMD)的发现 | 第8-9页 |
| 1．2 VIGS的提出 | 第9页 |
| 2 VIGS技术原理和机制 | 第9-11页 |
| 2．1 VIGS是转录后基因沉默 | 第9-10页 |
| 2．2 VIGS的本质是植物体对病毒侵染的防御机制 | 第10-11页 |
| 3 VIGS技术应用于植物功能基因组学研究的原理 | 第11页 |
| 4 VIGS技术的发展和应用 | 第11-13页 |
| 4．1 VIGS技术的发展 | 第11-12页 |
| 4．2 VIGS技术成功应用于基因功能研究的植物种类和载体系统 | 第12-13页 |
| 5 VIGS技术应用于植物功能基因组学研究中的进展和应用前景 | 第13-17页 |
| 5．1 VIGS应用于植物基因功能研究的进展 | 第13-15页 |
| 5．2 VIGS技术在植物功能基因组学研究中的应用前景 | 第15-17页 |
| 第二节 DHS基因研究进展 | 第17-19页 |
| 1 eIF-5A与细胞增殖及衰亡相关 | 第17-18页 |
| 2 eIF-5A可能作为核质穿梭蛋白，参与mRNA核外运系统 | 第18-19页 |
| 第二章 农杆菌介导的病毒诱导基因沉默体系的优化 | 第19-39页 |
| 1 前言 | 第19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-27页 |
| 2．1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2．2 实验方法 | 第20-27页 |
| 2．2．1 TRIzol提取总RNA | 第20-21页 |
| 2．2．2 PDS cDNA片段的克隆 | 第21-25页 |
| 2．2．3 重组马铃薯X组病毒载体向农杆菌导入 | 第25-26页 |
| 2．2．4 植物材料的感染 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-37页 |
| 3．1 病毒诱导PDS基因沉默的表型分析 | 第27-33页 |
| 3．1．1 本生烟草及普通烟草PDScDNA片段的分离 | 第27-28页 |
| 3．1．2 含PDS报告基因重组病毒载体的构建 | 第28-29页 |
| 3．1．3 含重组病毒载体的农杆菌转化子的菌液PCR检测 | 第29-30页 |
| 3．1．4 PDS基因沉默表型分析 | 第30-33页 |
| 3．2 农杆菌介导的病毒诱导基因沉默体系的优化 | 第33-37页 |
| 3．2．1 接种农杆菌生长状态对VIGS效率的影响 | 第33页 |
| 3．2．2 接种植物苗龄对VIGS效率的影响 | 第33页 |
| 3．2．3 片段同源性对VIGS效率的影响 | 第33-37页 |
| 4 讨论 | 第37-38页 |
| 5 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 利用病毒诱导基因沉默系统研究烟草DHS基因的功能 | 第39-66页 |
| 1 前言 | 第39页 |
| 2 材料与方法 | 第39-49页 |
| 2．1 实验材料 | 第39页 |
| 2．2 实验方法 | 第39-49页 |
| 2．2．1 TRIzol提取总RNA | 第39-40页 |
| 2．2．2 DHS cDNA片段的克隆 | 第40-42页 |
| 2．2．3 病毒载体PVX-NbDHS构建及向农杆菌导入 | 第42-44页 |
| 2．2．4 植物材料的感染 | 第44页 |
| 2．2．5 半定量RT-PCR | 第44-46页 |
| 2．2．6 Northern blot | 第46-48页 |
| 2．2．7 蛋白质印迹分析 | 第48-49页 |
| 2．2．8 叶绿素含量测定 | 第49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-62页 |
| 3．1 本生烟DHS cDNA片段的分离 | 第49-52页 |
| 3．1．1 cDNA片段的分离及序列同源比较 | 第49-52页 |
| 3．1．2 本生烟DHS基因拷贝数推测 | 第52页 |
| 3．2 病毒载体PVX-NbDHS构建及向农杆菌导入 | 第52-56页 |
| 3．3 PVX-NbDHS感染植株的DHS和eIF-5A基因表达水平分析 | 第56-58页 |
| 3．4 DHS沉默植株表型分析 | 第58-62页 |
| 3．4．1 DHS沉默对烟草生长的影响 | 第58-59页 |
| 3．4．2 DHS沉默对植物自然衰老的影响 | 第59-61页 |
| 3．4．3 DHS沉默对叶片叶绿素含量的影响 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-65页 |
| 5 小结 | 第65-66页 |
| 第四章 总结与展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 插图和附表清单 | 第75-77页 |
| 缩写词 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 在学期间发表的论文及承担科研项目 | 第80-82页 |
| 作者简介 | 第82页 |
