| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-42页 |
| 1．1 伪狂犬病病毒及其分子生物学慨述 | 第10-11页 |
| 1．2 活病毒载体研究进展 | 第11-16页 |
| 1．3 乙型脑炎及其危害 | 第16-18页 |
| 1．4 乙脑病毒的特性 | 第18-22页 |
| 1．5 乙脑病毒分子生物学研究进展 | 第22-31页 |
| 1．6 乙脑诊断方法研究概述 | 第31-33页 |
| 1．7 乙脑疫苗研究进展 | 第33-42页 |
| 第2章 研究目的意义 | 第42-43页 |
| 第3章 材料与方法 | 第43-62页 |
| 3．1 实验材料 | 第43-49页 |
| 3．2 实验方法 | 第49-62页 |
| 3．2．1 病毒的增殖 | 第49页 |
| 3．2．2 病毒基因组的提取 | 第49-50页 |
| 3．2．3 RT-PCR扩增与检测 | 第50页 |
| 3．2．4 RT-PCR产物的回收与纯化 | 第50-51页 |
| 3．2．5 连接反应 | 第51页 |
| 3．2．6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第51-52页 |
| 3．2．7 连接产物的转化 | 第52页 |
| 3．2．8 质粒的制备 | 第52-53页 |
| 3．2．9 质粒转染和表达细胞系的建立 | 第53页 |
| 3．2．10 诱导表达 | 第53页 |
| 3．2．11 JEV E、NS1、E-NS1基因的PCR扩增 | 第53-54页 |
| 3．2．12 重组转移载体的构建 | 第54页 |
| 3．2．13 脂质体介导的共转染 | 第54页 |
| 3．2．14 重组病毒的空斑筛选 | 第54-55页 |
| 3．2．15 重组病毒的空斑纯化与PCR鉴定 | 第55页 |
| 3．2．16 SDS-PAGE电泳 | 第55页 |
| 3．2．17 Western blot | 第55-56页 |
| 3．2．18 Southern杂交 | 第56-57页 |
| 3．2．19 动物试验用疫苗的制备 | 第57-58页 |
| 3．2．20 动物试验 | 第58页 |
| 3．2．21 微量中和试验 | 第58-59页 |
| 3．2．22 ELISA检侧 | 第59页 |
| 3．2．23 细胞免疫的检测 | 第59-61页 |
| 3．2．24 统计方法 | 第61-62页 |
| 第4章 结果与分析 | 第62-93页 |
| 4．1 乙脑病毒SA14-14-2株E及E-NS1基因的克隆及序列分析 | 第62-71页 |
| 4．1．1 JEV E和E-NS1基因cDNA的扩增与克隆 | 第62-64页 |
| 4．1．2 E和E-NS1基因的核苷酸序列测定及分析 | 第64-71页 |
| 4．2 乙脑病毒E基因在大肠杆菌和哺乳动物细胞中的表达 | 第71-75页 |
| 4．2．1 GST-E融合的原核表达质粒的构建与酶切鉴定 | 第71页 |
| 4．2．2 GST-E在大肠杆菌中的融合表达 | 第71-73页 |
| 4．2．3 原核表达产物Western blot检测 | 第73页 |
| 4．2．4 E基因重组真核表达质粒的构建与酶切鉴定 | 第73页 |
| 4．2．5 E基因在哺乳动物细胞中的表达 | 第73-75页 |
| 4．3 重组伪狂犬病毒TK~-/gG~-/NS1~+的构建 | 第75-85页 |
| 4．3．1 含NS1基因的转移质粒的构建 | 第75页 |
| 4．3．2 重组病毒TK~-/gG~-/NS1~+的筛选与纯化 | 第75-77页 |
| 4．3．3 重组病毒TK~-/gG~-/NS1~+的PCR鉴定 | 第77-79页 |
| 4．3．4 重组病毒TK~-/gG~-/NS1~+的Southern杂交鉴定 | 第79页 |
| 4．3．5 重组病毒TK~-/gG~-/NS1~+表达的NS1蛋白抗原性测定 | 第79-81页 |
| 4．3．6 重组病毒TK~-/gG~-/NS1~+在不同细胞上的增殖滴度 | 第81页 |
| 4．3．7 重组病毒TK~-/gG~-/NS1~+的遗传稳定性 | 第81页 |
| 4．3．8 重组病毒TK~-/gG~-/NS1~+二价基因工程疫苗的制备 | 第81页 |
| 4．3．9 重组病毒TK~-/gG~-/NS1~+的动物试验 | 第81-85页 |
| 4．4 重组伪狂犬病毒TK~-/gG~-/NS1~+的构建 | 第85-93页 |
| 4．4．1 含E基因的转移质粒的构建 | 第85-86页 |
| 4．4．2 重组病毒TK~-/gG~-/E~+的筛选与纯化 | 第86页 |
| 4．4．3 重组病毒TK~-/gG~-/E~+的Southern杂交鉴定 | 第86-87页 |
| 4．4．4 重组病毒TK~-/gG~-/E~+的Western blot鉴定 | 第87-88页 |
| 4．4．5 重组病毒TK~-/gG~-/E~+在不同细胞上的增殖滴度 | 第88页 |
| 4．4．6 重组病毒TK~-/gG~-/E~+的遗传稳定性 | 第88页 |
| 4．4．7 重组病毒TK~-/gG~-/E~+二价基因工程疫苗的制备 | 第88页 |
| 4．4．8 重组病毒TK~-/gG~-/E~+的动物试验 | 第88-93页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第93-99页 |
| 5．1 讨论 | 第93-98页 |
| 5．1．1 乙脑病毒E及E-NS1基因的克隆 | 第93-94页 |
| 5．1．2 乙脑病毒SA14-14-2株E基因的稳定性 | 第94页 |
| 5．1．3 E基因在体外的高效表达 | 第94-95页 |
| 5．1．4 载体病毒株的选择 | 第95页 |
| 5．1．5 表达乙脑病毒NS1或E蛋白的重组伪狂犬病病毒的构建 | 第95-96页 |
| 5．1．6 重组伪狂犬病病毒的生物学特性和安全性 | 第96-97页 |
| 5．1．7 表达乙脑病毒NS1或E蛋白的重组伪狂犬病病毒的免疫反应 | 第97-98页 |
| 5．2 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-115页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第115-117页 |
| 附录 | 第117-119页 |
| 致谢 | 第119页 |
