第一章 文献综述 | 第1-28页 |
1.1 亲和层析技术 | 第8-12页 |
1.1.1 前言 | 第8-9页 |
1.1.2 亲和层析的一般原理 | 第9-10页 |
1.1.3 亲和配基 | 第10-11页 |
1.1.4 亲和层析吸附常用载体 | 第11-12页 |
1.2 噬菌体展示技术 | 第12-18页 |
1.2.1 噬菌体展示技术的基本原理 | 第12-13页 |
1.2.2 噬菌体展示系统 | 第13页 |
1.2.3 噬菌体随机展示库的构建 | 第13-14页 |
1.2.4 噬菌体随机展示库的筛选方法 | 第14-16页 |
1.2.5 噬菌体展示技术的特点 | 第16-17页 |
1.2.6 筛选亲和分离蛋白质所需配基 | 第17-18页 |
1.3 多肽的固相合成 | 第18-27页 |
1.3.1 前言 | 第18页 |
1.3.2 多肽的合成简史 | 第18-19页 |
1.3.3 固相多肽合成原理 | 第19-21页 |
1.3.3.1 Boc 固相法(经典 Merrifield 固相法) | 第19-21页 |
1.3.3.2 Fmoc 固相法 | 第21页 |
1.3.4 固相合成法的优点 | 第21页 |
1.3.5 固相合成中的氨基酸保护 | 第21-22页 |
1.3.5.1 α-氨基保护基 | 第21-22页 |
1.3.5.2 α-羧基保护基 | 第22页 |
1.3.5.3 侧链基团的保护方法 | 第22页 |
1.3.6 肽键的形成 | 第22-25页 |
1.3.6.1 活化酯法 | 第23页 |
1.3.6.2 DCC 法 | 第23-24页 |
1.3.6.3 酰氯法 | 第24页 |
1.3.6.4 对称酸酐法和N-羧基酸酐法 | 第24-25页 |
1.3.6.5 原位法 | 第25页 |
1.3.7 多肽固相合成的监测 | 第25-26页 |
1.3.8 产物的分析方法 | 第26-27页 |
1.3.8.1 质谱分析(Mass Spectrometry, MS) | 第26页 |
1.3.8.2 SDS-PAGE 电泳 | 第26-27页 |
1.4 本文的研究目的和内容 | 第27-28页 |
第二章 不同肽配基的固相合成 | 第28-42页 |
2.1 前言 | 第28页 |
2.2 实验材料与设备 | 第28-29页 |
2.2.1 实验试剂 | 第28-29页 |
2.2.2 主要溶液的配制 | 第29页 |
2.2.3 实验设备 | 第29页 |
2.3 实验步骤与方法 | 第29-33页 |
2.3.1 多肽的合成 | 第30-32页 |
2.3.2 茚三酮定性显色(Kaiser)法 | 第32页 |
2.3.3 多肽的分析与鉴定 | 第32页 |
2.3.3.1 RP-HPLC 分析 | 第32页 |
2.3.3.2 质谱分析(Mass Spectrometry,MS) | 第32页 |
2.3.4 肽配基的固定和亲和柱的制备 | 第32-33页 |
2.3.5 亲和色谱操作条件 | 第33页 |
2.4 实验结果及讨论 | 第33-41页 |
2.4.1 七肽(HWWWPAS)的合成与分析 | 第33-34页 |
2.4.2 六肽的合成及分析 | 第34-39页 |
2.4.3 固定化琼脂糖六肽及七肽配基的亲和特性 | 第39-41页 |
2.5 小结 | 第41-42页 |
第三章 吸附介质的制备与应用 | 第42-55页 |
3.1 前言 | 第42页 |
3.2 实验材料与设备 | 第42-43页 |
3.2.1 实验试剂 | 第43页 |
3.2.2 实验设备 | 第43页 |
3.3 实验步骤与方法 | 第43-47页 |
3.3.1 合成原理 | 第43-44页 |
3.3.1.1 自由基聚合机理 | 第43-44页 |
3.3.1.2 悬浮聚合机理 | 第44页 |
3.3.2 介质的制备 | 第44-45页 |
3.3.2.1 聚合反应 | 第44页 |
3.3.2.2 致孔剂的去除 | 第44-45页 |
3.3.2.3 功能基化反应 | 第45页 |
3.3.3 微球介质修饰密度测定 | 第45-46页 |
3.3.3.1 酸碱滴定法 | 第46页 |
3.3.3.2 滴定曲线法 | 第46页 |
3.3.3.3 沉淀滴定法 | 第46页 |
3.3.4 介质的表征 | 第46-47页 |
3.3.5 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第47页 |
3.4 实验结果及讨论 | 第47-54页 |
3.4.1 介质的物理性质 | 第48页 |
3.4.2 介质表面氨基修饰密度的测定 | 第48-49页 |
3.4.3 PGE-hexapeptide 的合成 | 第49-51页 |
3.4.4 PGE-peptide 的亲和吸附特性 | 第51-52页 |
3.4.5 PGE-hexapeptide 对混合蛋白的分离 | 第52-54页 |
3.5 小结 | 第54-55页 |
第四章 结论 | 第55-56页 |
参考文献 | 第56-60页 |
攻读硕士学位期间主要学术成果 | 第60-61页 |
致谢 | 第61页 |