| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 主要縮略词 | 第5-9页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 1. 文献综述 | 第11-24页 |
| ·种子脱水耐性的获得 | 第11页 |
| ·种子应对脱水胁迫所产生的保护机制 | 第11-15页 |
| ·脱水对细胞的损害 | 第12页 |
| ·种子脱水耐性保护机制 | 第12-15页 |
| ·棉子糖系列寡糖 | 第15-18页 |
| ·棉子糖系列寡糖与种子耐脱水性的研究 | 第15-16页 |
| ·肌醇半乳糖苷合成酶研究进展 | 第16-18页 |
| ·植物转基因技术的研究进展 | 第18-21页 |
| ·转基因植物外源DNA整合的遗传效应 | 第21-22页 |
| 本研究的立题依据与技术路线 | 第22-24页 |
| 2 甘蓝型油菜BnGOLS1基因的原核表达、纯化和酶学性质分析 | 第24-30页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·缓冲液、培养基和抗生素 | 第24页 |
| ·其他试剂及溶液配制 | 第24-25页 |
| ·仪器设备 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-27页 |
| ·重组GS酶蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第25-26页 |
| ·Ni-NTA柱纯化目的蛋白产物 | 第26页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测目的蛋白 | 第26-27页 |
| ·经纯化过的重组GS酶蛋白酶活测定 | 第27页 |
| ·实验结果与分析 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测日的蛋白表达和纯化 | 第27页 |
| ·经纯化过的重组GOLS酶活测定 | 第27-28页 |
| ·小结 | 第28-30页 |
| 3 拟南芥种子脱水耐性获得过程的测定 | 第30-35页 |
| ·材料的准备 | 第30页 |
| ·植物材料的准备 | 第30页 |
| ·仪器设备 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-32页 |
| ·拟南芥种子干燥脱水方法的选用 | 第30-31页 |
| ·拟南芥种子含水量的测定 | 第31页 |
| ·人工干燥拟南芥种子 | 第31页 |
| ·拟南芥种子发芽率的测定 | 第31-32页 |
| ·实验结果与分析 | 第32-34页 |
| ·拟南芥不同成熟阶段种子的形态特征 | 第32页 |
| ·拟南芥种子干燥脱水方法的选用 | 第32页 |
| ·拟南芥种子发育过程中发芽率的变化 | 第32-33页 |
| ·拟南芥种子干燥脱水后发芽率的变化以及脱水耐性的获得 | 第33-34页 |
| ·小结 | 第34-35页 |
| 4. 农杆菌介导的BnGOLS1基因对油菜和拟南芥进行遗传转化 | 第35-43页 |
| ·材料的准备 | 第35-36页 |
| ·缓冲液、培养基和抗生素 | 第35页 |
| ·其他试剂及溶液配制 | 第35页 |
| ·引物 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-37页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第36页 |
| ·采用碱裂解法小量提取大肠杆菌质粒 | 第36-37页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌 | 第37页 |
| ·农杆菌介导侵染油菜 | 第37-38页 |
| ·农杆菌介导侵染陇油2号油菜角果/子房 | 第37-38页 |
| ·农杆菌侵染陇油2号油菜花 | 第38页 |
| ·抗性培养基筛选阳性株 | 第38页 |
| ·实验结果与分析 | 第38-39页 |
| ·质粒DNA完整性检测 | 第38-39页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌的验证 | 第39页 |
| ·农杆菌介导侵染陇油2号油菜角果/子房 | 第39页 |
| ·农杆菌侵染陇油2号油菜花 | 第39页 |
| ·农杆菌介导BnGOLS1基因对拟南芥进行遗传转化 | 第39-42页 |
| ·实验方法 | 第40-41页 |
| ·拟南芥在人工气候箱种植的方法 | 第40页 |
| ·拟南芥的转化和抗性株的筛选 | 第40-41页 |
| ·实验结果与分析 | 第41-42页 |
| ·拟南芥抗性苗的筛选 | 第41-42页 |
| ·转基因株系的获得 | 第42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 5 转基因植物的鉴定和基因功能分析 | 第43-55页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·主要药品 | 第43页 |
| ·仪器 | 第43页 |
| ·主要试剂配制 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-47页 |
| ·拟南芥基因组DNA的提取 | 第43-44页 |
| ·拟南芥抗性苗的PCR验证 | 第44-45页 |
| ·拟南芥抗性苗的Southern杂交验证 | 第45-46页 |
| ·探针制备 | 第45页 |
| ·酶切拟南芥基因组DNA | 第45页 |
| ·杂交 | 第45-46页 |
| ·转基因拟南芥GOLS酶活性检测 | 第46页 |
| ·液相色谱检测可溶性糖含量 | 第46-47页 |
| ·拟南芥可溶性糖提取物的制备 | 第46页 |
| ·高效液相色谱(HPLC)测定拟南芥提取物中可溶性糖含量 | 第46-47页 |
| ·转BnGOLS1基因拟南芥的表型分析 | 第47页 |
| ·实验结果与分析 | 第47-54页 |
| ·拟南芥基因组DNA的提取 | 第47-48页 |
| ·拟南芥抗性苗的PCR验证 | 第48页 |
| ·拟南芥抗性苗的Southern杂交验证 | 第48-50页 |
| ·探针制备 | 第48-49页 |
| ·杂交 | 第49-50页 |
| ·转基因拟南芥GOLS酶活性检测 | 第50页 |
| ·拟南芥提取物中可溶性糖含量 | 第50-52页 |
| ·转BnGOLS1基因拟南芥的表型分析 | 第52-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 6 转GS启动子-GUS的转基因拟南芥分析和转napin启动子-G5基因拟南芥的获得 | 第55-58页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·试剂与仪器 | 第55页 |
| ·试剂配制 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-56页 |
| ·拟南芥抗性苗的PCR验证 | 第55页 |
| ·转基因拟南芥植株的胁迫处理 | 第55页 |
| ·拟南芥植株的GUS染色 | 第55-56页 |
| ·实验结果与分析 | 第56-57页 |
| ·拟南芥抗性苗的PCR验证 | 第56页 |
| ·拟南芥植株的胁迫处理和GUS染色 | 第56-57页 |
| ·对转napin启动子-GS基因的研究 | 第57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 7 讨论 | 第58-63页 |
| ·甘蓝型油菜BnGOLS1基因酶学性质分析 | 第58页 |
| ·拟南芥种子脱水耐性获得过程的测定 | 第58-60页 |
| ·农杆菌介导的BnGOLS1基因对油菜进行遗传转化 | 第60-61页 |
| ·转BnGOLS1基因拟南芥的生理生化及表型研究 | 第61-63页 |
| 8 结论 | 第63-64页 |
| 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 附录一 | 第72-73页 |
| 附录二 | 第73-74页 |
| 个人简介 | 第74-75页 |
| 导师简介 | 第75-76页 |
| 获得成果目录清单 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
