| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-25页 |
| 1. HIV简介 | 第12-13页 |
| ·HIV的发现及分类学地位 | 第12页 |
| ·HIV的基因组结构 | 第12-13页 |
| ·HIV的生物学特征 | 第13页 |
| 2. HIV疫苗研究中的动物模型 | 第13-14页 |
| 3. HIV感染的细胞免疫应答 | 第14-16页 |
| 4. HIV感染的体液免疫应答 | 第16页 |
| 5. 艾滋病疫苗的研究策略 | 第16-21页 |
| ·传统的艾滋病疫苗研究策略 | 第16-17页 |
| ·新型艾滋病疫苗研究策略 | 第17-21页 |
| ·DNA疫苗的研究进展 | 第17-18页 |
| ·活载体疫苗的研究进展 | 第18-21页 |
| 6. 免疫治疗 | 第21-22页 |
| 7. 临床试验 | 第22-23页 |
| 8. 实验目的 | 第23-25页 |
| 材料和方法 | 第25-45页 |
| 1. 材料 | 第25-28页 |
| ·工具酶 | 第25页 |
| ·试剂盒 | 第25页 |
| ·质粒和菌株 | 第25-26页 |
| ·细胞和毒株 | 第26页 |
| ·抗体和多肽 | 第26页 |
| ·主要生化试剂 | 第26-27页 |
| ·实验动物 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·常用溶液配方 | 第27-28页 |
| 2. 实验方法 | 第28-45页 |
| ·转移质粒载体pVI75的构建 | 第28-34页 |
| ·重组质粒pJSD-neo的构建 | 第29-31页 |
| ·lacZ'-PH6-neo-polyA片段的获得 | 第31-32页 |
| ·大片段lacZ'-PH6-neo-polyA克隆及测序 | 第32-33页 |
| ·转移质粒载体pVI75的构建 | 第33-34页 |
| ·重组转移质粒载体pVI75-gagpol的构建 | 第34-35页 |
| ·重组转移质粒载体pVI75-syngpnef-syngp120的构建 | 第35-37页 |
| ·重组质粒pVI75-syngp120的构建 | 第35页 |
| ·PCR扩增含有启动子pE／L的目的片段pE／L-syngp120 | 第35页 |
| ·片段pE／L-gp120克隆及测序 | 第35页 |
| ·重组质粒pVI75-syngpnef-syngp120的构建 | 第35-37页 |
| ·重组痘苗病毒疫苗株rVV-gagpol的构建、筛选及纯化 | 第37-39页 |
| ·重组质粒pVI75-gagpol与痘苗病毒天坛株共转染鸡胚细胞 | 第37页 |
| ·重组痘苗病毒的筛选 | 第37-38页 |
| ·重组痘苗病毒rVV-gagpol的鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组痘苗病毒疫苗株rVV-syngpnef-syngp120的构建、筛选及纯化 | 第39-41页 |
| ·重组质粒pVI75-syngpnef-syngp120与痘苗病毒天坛株共转染鸡胚细胞 | 第39页 |
| ·重组痘苗病毒的筛选 | 第39-40页 |
| ·重组痘苗病毒rVV-syngpnef-syngp120的鉴定 | 第40-41页 |
| ·动物实验 | 第41-45页 |
| ·免疫原的制备 | 第41页 |
| ·免疫剂量和途径 | 第41页 |
| ·免疫方案及程序 | 第41-42页 |
| ·结合抗体的检测 | 第42-43页 |
| ·小鼠血清中Gag特异性IgG亚类抗体IgG2a和IgG1的检测 | 第43页 |
| ·流式细胞仪检测细胞免疫反应水平 | 第43-45页 |
| 结果与分析 | 第45-60页 |
| 1. 转移质粒载体pVI75的构建 | 第45-47页 |
| ·质粒pJSD-neo的酶切分析 | 第45页 |
| ·片段lacZ'-PH6-neo-polyA的获得 | 第45-46页 |
| ·PCR扩增片段PH6-neo-polyA | 第45页 |
| ·PCR扩增lacZ' | 第45-46页 |
| ·PCR扩增片段lacZ'-PH6-neo-polyA | 第46页 |
| ·将片段lacZ'-PH6-neo-polyA连接到T载体并进行测序分析 | 第46页 |
| ·转移质粒载体pVI75的酶切鉴定 | 第46-47页 |
| 2. 重组质粒pVI75-gagpol的鉴定 | 第47页 |
| 3. 重组转移质粒载体pVI75-syngpnef-syngp120的构建 | 第47-49页 |
| ·重组质粒pVI75-syngp120的构建 | 第47-48页 |
| ·PCR扩增含有启动子pE／L的目的片段pE／L-syngp120 | 第48页 |
| ·质粒pT-pE／L-syngp120的鉴定及测序分析 | 第48页 |
| ·重组质粒pVI75-syngpnef-syngp120的酶切鉴定 | 第48-49页 |
| 4. 重组痘苗病毒rVV-gagpol的构建 | 第49-52页 |
| ·重组痘苗病毒目的基因gagpol的PCR鉴定 | 第50-51页 |
| ·抗体染色法筛选重组痘苗病毒 | 第51页 |
| ·Western blot检测重组痘苗病毒rVV-gagpol中目的基因的表达 | 第51-52页 |
| ·痘苗病毒rVV-gagpol的Dot blot鉴定 | 第52页 |
| 5. 重组痘苗病毒rVV-syngpnef-syngp120的构建 | 第52-55页 |
| ·重组痘苗病毒rVV-syngpnef-syngp120目的基因的PCR鉴定 | 第53-54页 |
| ·Western blot检测重组痘苗病毒表达的Syngpnef和Syngp120蛋白 | 第54页 |
| ·重组痘苗病毒rVV-syngpnef-syngp120的Dot blot鉴定 | 第54页 |
| ·重组痘苗病毒的纯化鉴定 | 第54-55页 |
| 6. 动物免疫实验结果 | 第55-60页 |
| ·血清Gag特异性结合抗体IgG水平的检测 | 第55-56页 |
| ·血清Gag特异性IgG2a、IgG1亚类抗体水平的检测 | 第56页 |
| ·血清Env特异性结合抗体IgG水平的检测 | 第56-57页 |
| ·流式细胞仪检测细胞免疫反应水平 | 第57-60页 |
| 讨论 | 第60-68页 |
| 1. 重组痘苗病毒疫苗株筛选平台的建立 | 第61-63页 |
| 2. 抗原的选择 | 第63-64页 |
| 3. 表达HIV多价重组痘苗病毒疫苗株的筛选和鉴定 | 第64页 |
| 4. 免疫效果的研究 | 第64-68页 |
| ·gagpol组和syngpnef组小鼠体内诱发的免疫应答 | 第65-66页 |
| ·syngpnef+syngp120组和syngpnef-syngp120组小鼠体内诱发的免疫应答 | 第66-68页 |
| 小结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 附录 | 第80-85页 |
