| 致谢 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 1. 引言 | 第12-20页 |
| ·逆转座子概述 | 第12-13页 |
| ·逆转座子LINE-1的结构特征 | 第13页 |
| ·逆转座子LINE-1的功能 | 第13-18页 |
| ·LINE-1与体细胞的转录 | 第13-14页 |
| ·LINE-1与新着丝点的形成 | 第14页 |
| ·LINE-1与X染色体失活 | 第14-15页 |
| ·LINE-1在插入偏移和自然选择中的作用 | 第15-16页 |
| ·DNA损伤活化LINE-1转座元件 | 第16页 |
| ·LINE-1对细胞生物学功能的影响 | 第16-17页 |
| ·癌症与LINE-1逆转座子 | 第17-18页 |
| ·逆转座子LINE-1的调控机制 | 第18-20页 |
| ·LINE-1作为非编码序列在细胞中的调控作用 | 第18-19页 |
| ·LINE-1编码序列参与对自身来源siRNA的调控 | 第19-20页 |
| 2. 实验材料、仪器与试剂配制 | 第20-23页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·实验仪器 | 第20-21页 |
| ·试剂配制 | 第21-23页 |
| ·细菌培养所用试剂配制 | 第21页 |
| ·细胞培养所用试剂配制 | 第21-22页 |
| ·其他试剂配制 | 第22-23页 |
| 3. 实验方法 | 第23-40页 |
| ·LINE-1调控靶基因的鉴定 | 第23-29页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第23页 |
| ·pSilencer2.1-neo、pSilencer 2,1-neo-RNAi和pIRES-neoHL1(ORF1)-1质粒的转化 | 第23-24页 |
| ·转染质粒的提取 | 第24-25页 |
| ·细胞转染 | 第25-27页 |
| ·细胞复苏 | 第25页 |
| ·细胞培养 | 第25页 |
| ·细胞冻存 | 第25-26页 |
| ·pSilencer2.1-neo、pSilencer 2,1-neo-RNAi和pIRES-neoHL1(ORF1)-1质粒转染细胞 | 第26-27页 |
| ·RT-PCR半定量检测DNA表达 | 第27-28页 |
| ·Trizol法提取细胞mRNA | 第27页 |
| ·逆转录反应 | 第27页 |
| ·PCR反应 | 第27-28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果 | 第28页 |
| ·荧光定量PCR检测DNA表达 | 第28-29页 |
| ·LINE-1调控靶基因的机制 | 第29-40页 |
| ·pIRES-neoL15'UTRf与pIRES-neoL15'UTRr表达载体的构建 | 第29-34页 |
| ·目的基因片段的选择 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第30页 |
| ·PCR反应体系 | 第30-31页 |
| ·PCR产物的切胶纯化 | 第31页 |
| ·双酶切 | 第31-32页 |
| ·载体与片段连接 | 第32-33页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞E.coli DH5α | 第33页 |
| ·阳性重组质粒的酶切鉴定与测序 | 第33-34页 |
| ·转染质粒的提取 | 第34-35页 |
| ·细胞转染 | 第35页 |
| ·RT-PCR检测DNA表达 | 第35-37页 |
| ·Trizol法提取细胞mRNA | 第35-36页 |
| ·4.2 逆转录反应 | 第36页 |
| ·荧光定量PCR检测目的基因的表达 | 第36-37页 |
| ·基因启动子甲基化检测 | 第37-40页 |
| ·细胞转染 | 第37页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·HapⅡ和MspⅠ酶切体系 | 第38页 |
| ·荧光定量PCR检测基因表达 | 第38-40页 |
| 4 实验结果 | 第40-59页 |
| ·LINE-1调控靶基因的鉴定 | 第40-44页 |
| ·LINE-1调控基因的筛查与分析 | 第40-41页 |
| ·转染不同载体对HepG2细胞靶基因表达的影响 | 第41-44页 |
| ·RT-PCR结果 | 第41-43页 |
| ·荧光定量PCR结果 | 第43-44页 |
| ·LINE-1调控靶基因的机制 | 第44-59页 |
| ·pIRES-neoL15'UTRf和pIRES-neoL15'UTRr载体构建 | 第44-45页 |
| ·LINE-15'UTR不同转录产物对靶基因表达的影响 | 第45-46页 |
| ·LINE-15'UTR和ORF1对靶基因mRNA稳定性影响的检测 | 第46-56页 |
| ·LINE-15'UTR对调控靶基因mRNA稳定性的影响 | 第46-51页 |
| ·下调LINE-1 ORF1对基因mRNA稳定性的影响 | 第51-56页 |
| ·LINE-1 5'UTR序列对靶基因启动子甲基化的影响 | 第56-57页 |
| ·LINE-1 ORF1干扰序列对靶基因启动子甲基化的影响 | 第57-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 6 讨论 | 第60-63页 |
| ·下调LINE-1 ORF1对基因表达的影响 | 第60页 |
| ·LINE-1 5'UTR序列对基因表达的影响 | 第60-61页 |
| ·LINE-1 ORF1和5'UTR序列对基因启动子甲基化的影响 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-65页 |
| 附录A | 第65-66页 |
| 作者简历 | 第66-68页 |
| 学位论文数据集 | 第68页 |
