| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 引言 | 第11-23页 |
| 1 人ACAT-1基因概述 | 第11-19页 |
| ·ACAF研究的历史背景 | 第11-12页 |
| ·ACAT基因的克隆及ACAT家族的发现 | 第12-14页 |
| ·ACNIT-1基因的组织结构 | 第14-15页 |
| ·ACAT的组织细胞分布与生物活性 | 第15-17页 |
| ·ACAT组织分布特异性 | 第15-16页 |
| ·ACAT在细胞内的分布 | 第16-17页 |
| ·ACAT的生物活性 | 第17页 |
| ·ACAT-1基因的表达调控 | 第17-18页 |
| ·底物水平 | 第17页 |
| ·转录水平 | 第17-18页 |
| ·转录后RNA的剪接水平 | 第18页 |
| ·翻译水平 | 第18页 |
| ·ACAT-1功能分析 | 第18-19页 |
| 2 TNF-α与NF-κB信号途径 | 第19-21页 |
| ·TNF-α的生物学特征 | 第19页 |
| ·TNF-α和人ACAT-1基因 | 第19页 |
| ·TNF-α与NF-κB信号转导途径 | 第19-21页 |
| 3 展望 | 第21页 |
| 4 本课题研究工作 | 第21-23页 |
| 材料和方法 | 第23-31页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| ·药品、试剂和仪器设备 | 第23页 |
| ·细胞株 | 第23页 |
| ·菌种和质粒 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-31页 |
| ·细胞总RNA的制备及RT-PCR分析 | 第24-25页 |
| ·细胞总RNA的制备 | 第24页 |
| ·逆转录PCR反应(RT-CR)分析 | 第24-25页 |
| ·cDNA的合成 | 第24-25页 |
| ·PCR反应 | 第25页 |
| ·DEAE-Dextran介导的细胞瞬州时转染及表达酶活测定 | 第25-26页 |
| ·用DEAE-Dextran法转染THP-1细胞 | 第25-26页 |
| ·荧光素酶活分析 | 第26页 |
| ·β-半乳糖精苷酶活性分析 | 第26页 |
| ·一系列启动子片断-荧光素酶报告基因表达质粒的构建 | 第26-28页 |
| ·用PCR方法获得含有点突变片断 | 第26-27页 |
| ·酶切和连接 | 第27页 |
| ·电穿孔细胞转化 | 第27页 |
| ·转化子鉴定 | 第27-28页 |
| ·质粒的大量抽提及纯化 | 第28页 |
| ·细胞核蛋白的制备 | 第28-29页 |
| ·凝胶阻抑分析(Elecltrophoresis Mobility Shift Assays，FMSA) | 第29-31页 |
| 结果 | 第31-53页 |
| 1 DEAE-Dextran介导的THP-1细胞转染外源报告基因质粒表达测活分析系统的建立 | 第31-34页 |
| ·DEAE-Dextran对THP-1细胞的毒性影响 | 第31页 |
| ·DEAE-Dextran介导的THP-1细胞转染外源质粒的效率优化 | 第31-33页 |
| ·DEAE-Dextran介导的THP-1细胞转染外源报告基因质粒表达测活分析系统的建立 | 第33-34页 |
| 2 TNF-α通过NF-κB信号途径增强人内源ACAT-1基因的表达 | 第34-38页 |
| ·TPCK抑制TNF-α对人内源ACAT-1的增强表达 | 第34-36页 |
| ·突变型IκB的表达质粒抑制TNF-α对人内源ACAT-1的增强表达 | 第36-38页 |
| 3 TNF-α通过NF-κB信号途径增强调控人ACAT-1基因P1启动子活性 | 第38-42页 |
| ·TPCK和MG132抑制TNF-α对人ACAT-1基因P1启动子活性的增强调控作用 | 第38-40页 |
| ·突变型IκB的表达质粒抑制TNF-α对人ACAT-1基因P1启动子活性的增强调控作用 | 第40-41页 |
| ·突变型p65蛋白表达质粒抑制TNF-α对人ACAT-1基因P1启动子活性的增强调控作用 | 第41-42页 |
| 4 人ACAT-1基因P1启动子的TNF-α效应元件分析鉴定 | 第42-53页 |
| ·人ACAT-1基因P1启动子TNF-α效应DNA区域的计算机分析 | 第42-43页 |
| ·P1启动子核心序列点突变-荧光素酶报告基因表达质粒鉴定NF-κB顺式元件 | 第43-49页 |
| ·点突变-报告基因质粒构建 | 第43-48页 |
| ·点突变-报告基因质粒转染与瞬时表达荧光素酶活性的测定 | 第48-49页 |
| ·人ACAT-基因P1启动子的TNF-α效应元件NF-κB的分析鉴定 | 第49-53页 |
| ·EMSA分析人ACAT-1基因P1启动子的TNF-α效应元件 | 第49-50页 |
| ·TPCK和MG132对TNF-α上调P1 NF-κB核内复合物形成的影响 | 第50-53页 |
| 讨论 | 第53-58页 |
| 1 DEAE-Dextran介导的转染表达系统 | 第53页 |
| 2 TNF-α活化NF-κB通路的抑制 | 第53-54页 |
| 3 人ACAT-1基因P1中NFκB元件分析 | 第54-56页 |
| 4 TNF-α显著增强人单核细胞株中ACAT-1基因的表达的病理意义 | 第56-57页 |
| 5 NF-κB与动脉粥样硬化病变 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
