| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 本文主要缩写词 | 第10-11页 |
| Ⅰ 文献综述 | 第11-27页 |
| ·水稻转基因技术的发展 | 第11-13页 |
| ·以原生质体为受体的转化 | 第11-12页 |
| ·PEG法 | 第11页 |
| ·电击法 | 第11-12页 |
| ·其它转化方法 | 第12页 |
| ·基因枪转化法 | 第12-13页 |
| ·根癌农杆菌介导法 | 第13页 |
| ·无选择标记转基因植物研究进展 | 第13-19页 |
| ·标记基因 | 第13-14页 |
| ·在转基因植物中去除选择标记基因的必要性 | 第14-15页 |
| ·去除选择标记基因的策略 | 第15-19页 |
| ·共转化 | 第15-16页 |
| ·位点特异性重组系统 | 第16-18页 |
| ·利用转座子成分删除选择标记基因 | 第18页 |
| ·同源序列重组删除选择标记基因 | 第18页 |
| ·多次自动转化(MAT)载体系统 | 第18-19页 |
| ·抗虫转基因水稻的研究进展 | 第19-25页 |
| ·抗虫基因及其特点 | 第19-22页 |
| ·目前植物转基因工程中存在的主要问题及解决策略 | 第22-23页 |
| ·转双价抗虫基因植物的研究 | 第23-25页 |
| ·转双价抗虫基因植物的提出 | 第23-24页 |
| ·转双价抗虫基因植物研究的意义 | 第24页 |
| ·转双价抗虫基因植物的研究现状 | 第24-25页 |
| ·本文立题思想 | 第25-27页 |
| Ⅱ 材料与方法 | 第27-33页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·供试水稻品种 | 第27页 |
| ·菌株和质粒 | 第27-28页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第28页 |
| ·主要实验试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-33页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·水稻胚性愈伤组织的诱导及继代 | 第28-29页 |
| ·根农杆菌介导的水稻转化 | 第29-30页 |
| ·根农杆菌的培养及处理 | 第29页 |
| ·愈伤组织的预培养 | 第29页 |
| ·共培养 | 第29页 |
| ·洗除根农杆菌 | 第29页 |
| ·愈伤组织筛选培养 | 第29页 |
| ·转化率、分化率和共转化率的计算 | 第29页 |
| ·抗性愈伤的继代与再生成完整植株 | 第29-30页 |
| ·水稻叶片DNA提取 | 第30页 |
| ·PCR检测转基因植株 | 第30-31页 |
| ·样品可溶性蛋白提取 | 第31页 |
| ·Bradford法测定样品中可溶性蛋白蛋白浓度 | 第31页 |
| ·双抗夹心法测转基因水稻中Bt含量 | 第31-32页 |
| ·转基因植株潮霉素抗性测定 | 第32页 |
| ·转基因植株的田间种植与管理 | 第32页 |
| ·转基因植株及其后代的田间抗虫性调查 | 第32-33页 |
| Ⅲ 结果与分析 | 第33-43页 |
| ·双T-DNA载体转化明恢86愈伤组织获得大量潮霉素抗性植株 | 第33-35页 |
| ·明恢86愈伤组织的诱导、继代及再分化 | 第33页 |
| ·潮霉素抗性愈伤组织的获得 | 第33-34页 |
| ·抗性愈伤诱导分化获得再生植株 | 第34-35页 |
| ·转基因T_0代的检测 | 第35-38页 |
| ·转基因T_0代共转化频率检测 | 第35-37页 |
| ·T_0代株系Bt蛋白的ELISA检测 | 第37-38页 |
| ·T_1代植株中目的基因和标记基因的分离和表达检测 | 第38-40页 |
| ·T_1代植株的PCR检测 | 第38-39页 |
| ·T_1代植株的ELISA检测 | 第39-40页 |
| ·T_2代的检测 | 第40-43页 |
| ·T_1代自交种子(T_2代)的潮霉素抗性分离测定 | 第40-41页 |
| ·T_2代植株检测获得纯合无选择标记的转sck+Bt基因株系 | 第41-42页 |
| ·纯合无选择标记转双价基因抗虫株系的获得 | 第42-43页 |
| Ⅳ 讨论 | 第43-46页 |
| ·农杆菌介导获得无选择标记转双价基因(sck+Bt)抗虫籼稻的意义 | 第43页 |
| ·利用双T-DNA策略获得无选择标记基因的转基因水稻存在的问题 | 第43页 |
| ·位点特异性重组-Cre／loxp系统 | 第43-44页 |
| ·转基因植物中的基因沉默现象 | 第44页 |
| ·无选择标记转基因植物的前景展望 | 第44-46页 |
| Ⅵ 参考文献 | 第46-53页 |
| 附件 | 第53-59页 |
| 附件1: Bt蛋白ELISA检测的标准曲线及酶标板显色图 | 第53-54页 |
| 附件2: 修饰后的CpTI基因SCK序列及对应编码氨基酸序列 | 第54-55页 |
| 附件3: 本研究所用基本培养基配方 | 第55-58页 |
| 附件4: 部分溶液的配制方法 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
