| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-27页 |
| 1．1 BVD/MD简介 | 第9-11页 |
| 1．2 流行病学特征 | 第11-12页 |
| 1．3 感染特点及临床诊断 | 第12-18页 |
| 1．3．1 持续性感染与免疫耐受 | 第12-13页 |
| 1．3．2 粘膜病与慢性BVD | 第13-14页 |
| 1．3．3 急性BVD | 第14-15页 |
| 1．3．4 免疫抑制 | 第15-16页 |
| 1．3．5 血小板减少症和出血综合症 | 第16-18页 |
| 1．4 病理学变化 | 第18页 |
| 1．5 病毒的分离培养及检测 | 第18-20页 |
| 1．5．1 病毒的分离培养 | 第19页 |
| 1．5．2 电镜检查 | 第19-20页 |
| 1．6 动物接种 | 第20页 |
| 1．7 血清学诊断 | 第20-24页 |
| 1．7．1 微量血清中和试验检测血清抗体 | 第20-21页 |
| 1．7．2 免疫琼脂扩散 | 第21-22页 |
| 1．7．3 免疫荧光 | 第22页 |
| 1．7．4 免疫过氧化物酶法 | 第22-23页 |
| 1．7．5 酶联免疫吸附试验 | 第23-24页 |
| 1．8 分子生物学诊断技术 | 第24-27页 |
| 1．8．1 牛病毒性腹泻/粘膜病的分子生物学特征 | 第24-25页 |
| 1．8．2 核酸探针杂交技术 | 第25-26页 |
| 1．8．3 反转录-多聚酶链式反应 | 第26-27页 |
| 2 反转录-套式多聚酶链式反应检测BVDV | 第27-44页 |
| 2．1 BVDV河南地方株的分离和鉴定 | 第29-35页 |
| 2．1．1 材料 | 第29-30页 |
| 2．1．1．1 BVDV标准株 | 第29页 |
| 2．1．1．2 细胞 | 第29页 |
| 2．1．1．3 细胞培养所需试剂 | 第29页 |
| 2．1．1．4 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2．1．2 方法 | 第30-32页 |
| 2．1．2．1 传代细胞的培养及病毒的增殖 | 第30-31页 |
| 2．1．2．1．1 细胞复苏与培养 | 第30页 |
| 2．1．2．1．2 病料的采集 | 第30页 |
| 2．1．2．1．3 病毒的增殖 | 第30-31页 |
| 2．1．2．2 分离毒TCID_（50）/0．1ml的测定 | 第31页 |
| 2．1．2．3 微量法血清中和试验鉴定 | 第31页 |
| 2．1．2．4 琼脂扩散试验鉴定 | 第31-32页 |
| 2．1．3 结果 | 第32-34页 |
| 2．1．3．1 细胞培养病毒结果 | 第32页 |
| 2．1．3．2 TCID_（50）/0．1ml值的测定 | 第32-33页 |
| 2．1．3．3 血清中和试验结果 | 第33页 |
| 2．1．3．4 琼脂扩散试验结果 | 第33-34页 |
| 2．1．4 小结 | 第34-35页 |
| 2．2 BVDV的套式PCR扩增 | 第35-44页 |
| 2．2．1 材料 | 第35-36页 |
| 2．2．1．1 BVDV及对照病毒 | 第35页 |
| 2．2．1．2 细胞 | 第35页 |
| 2．2．1．3 RNA抽提所用试剂 | 第35页 |
| 2．2．1．4 PCR所用试剂 | 第35-36页 |
| 2．2．1．5 主要仪器 | 第36页 |
| 2．2．2 方法 | 第36-41页 |
| 2．2．2．1 病毒的增殖 | 第36-37页 |
| 2．2．2．2 病毒RNA的提取 | 第37页 |
| 2．2．2．3 引物设计与合成 | 第37-38页 |
| 2．2．2．4 PCR技术操作方法 | 第38-39页 |
| 2．2．2．4．1 反转录 | 第38页 |
| 2．2．2．4．2 PCR扩增 | 第38-39页 |
| 2．2．2．4．3 套式PCR | 第39页 |
| 2．2．2．5 PCR的特异性测定 | 第39页 |
| 2．2．2．6 PCR的灵敏度测定 | 第39页 |
| 2．2．2．7 PCR产物的检测 | 第39-40页 |
| 2．2．2．8 PCR扩增的重复性测定 | 第40页 |
| 2．2．2．9 RT-套式PCR检测自然感染牛血清中的BVDV | 第40-41页 |
| 2．2．3 结果 | 第41-44页 |
| 2．2．3．1 BVDV在MDBK细胞上的增殖 | 第41-42页 |
| 2．2．3．1．1 正常的MDBK细胞培养48小时的生长情况 | 第41页 |
| 2．2．3．1．2 BVDV在MDBK细胞上产生CEP | 第41-42页 |
| 2．2．3．2 病毒RNA的提取 | 第42页 |
| 2．2．3．3 RT-套式PCR建立与检测结果 | 第42-44页 |
| 2．2．3．3．1 PCR扩增结果 | 第42-43页 |
| 2．2．3．3．2 特异性试验结果 | 第43页 |
| 2．2．3．3．3 灵敏度试验结果 | 第43页 |
| 2．2．3．3．4 病料检测结果 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-48页 |
| 3．1 关于套式PCR技术对BVDV的诊断与猪瘟病毒的区分 | 第44页 |
| 3．2 关于套式PCR技术对BVDV检测的特异性 | 第44-45页 |
| 3．3 套式PCR技术检测BVDV灵敏性与重复性 | 第45页 |
| 3．4 套式PCR技术检测BYDV操作中关于模板RNA的制备与保存 | 第45-46页 |
| 3．5 关于BVDV检测技术 | 第46-47页 |
| 3．6 关于套式PCR技术检测BVDV在生产实践中的应用问题 | 第47-48页 |
| 4 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-58页 |
| 英文摘要 | 第58-60页 |
| 附录 | 第60-61页 |
