| 致谢 | 第1-7页 |
| 前言 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 目次 | 第11-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-29页 |
| 第一节 猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究进展 | 第15-23页 |
| 1 病原学特征 | 第15-16页 |
| ·种属特异性及分类 | 第15页 |
| ·形态及理化特征 | 第15-16页 |
| 2 分子生物学特征 | 第16-19页 |
| ·基因组结构特征 | 第16-17页 |
| ·编码的蛋白 | 第17-19页 |
| ·RNA聚合酶 | 第17页 |
| ·结构蛋白 | 第17-19页 |
| 3 PRRSV致病机理 | 第19-20页 |
| 4 免疫防治的现状及问题 | 第20页 |
| 5 PRRSV的实验室诊断方法 | 第20-22页 |
| ·病毒的分离 | 第20页 |
| ·血清学诊断 | 第20-21页 |
| ·反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第21页 |
| ·胶体金免疫层析法(GICA) | 第21-22页 |
| 6 结语 | 第22-23页 |
| 第二节 卵黄抗体(IgY)的生物学特性及其应用 | 第23-29页 |
| 1 IgY的分子结构及理化特性 | 第23-24页 |
| ·IgY的形成 | 第23页 |
| ·IgY的分子特性 | 第23-24页 |
| ·IgY的理化性质稳定 | 第24页 |
| ·热稳定性 | 第24页 |
| ·不同pH值环境和酶降解作用下的稳定性 | 第24页 |
| 2 与哺乳动物IgG在结构与功能上的差别 | 第24-26页 |
| ·IgY与其他免疫球蛋白之间的关联 | 第24-25页 |
| ·IgY相对于哺乳动物IgG的优势 | 第25-26页 |
| 3 鸡卵黄抗体IgY抑制病源微生物的作用机理 | 第26页 |
| ·特异性IgY阻断细菌与靶细胞结合 | 第26页 |
| ·特异性IgY抑制细菌生长和细菌功能的表达 | 第26页 |
| ·特异性IgY改变细胞表面结构 | 第26页 |
| 4 IgY抗体的应用与前景展望 | 第26-28页 |
| ·IgY的使用方式 | 第26-27页 |
| ·IgY抗体在疾病预防和治疗方面的应用 | 第27页 |
| ·IgY抗体在免疫检测方面的应用 | 第27-28页 |
| 5 结语 | 第28-29页 |
| 第二章 猪繁殖与呼吸综合征N基因的原核表达 | 第29-42页 |
| 1 材料与方法 | 第29-30页 |
| ·菌株及质粒 | 第29页 |
| ·分子生物学试剂 | 第29页 |
| ·普通化学试剂和免疫学试剂 | 第29页 |
| ·主要化学试剂的配制 | 第29-30页 |
| ·IPTG溶液 | 第29页 |
| ·Ni-NTA蛋白纯化缓冲液 | 第29-30页 |
| ·标准品BSA(1mg/ml) | 第30页 |
| ·Bradford工作液 | 第30页 |
| ·ELISA试剂 | 第30页 |
| ·Western Blotting试剂 | 第30页 |
| 2 试验方法 | 第30-38页 |
| ·表达载体的构建 | 第30-34页 |
| ·引物设计与合成 | 第30-31页 |
| ·PRRSV核衣壳蛋白基因的扩增(RT-PCR) | 第31-33页 |
| ·pET-30a(+)质粒DNA的提取 | 第33页 |
| ·重组表达质粒pET30a(+)-N的构建 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pET30a(+)-N在大肠杆菌中的表达 | 第34-37页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第34页 |
| ·重组PRRSV-N蛋白可溶性分析 | 第34-35页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第35-36页 |
| ·表达产物的纯化及蛋白浓度的测定 | 第36页 |
| ·Western-blotting分析 | 第36-37页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-41页 |
| ·PCR扩增PRRSV N基因 | 第38页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第39页 |
| ·重组N蛋白的原核表达分析 | 第39页 |
| ·重组N蛋白的纯化及浓度测定 | 第39页 |
| ·Western blotting分析重组蛋白的免疫反应性 | 第39-40页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 抗猪繁殖与呼吸综合征全病毒及核衣壳蛋白(N)卵黄抗体的制备及鉴定 | 第42-49页 |
| 1 材料与方法 | 第42-45页 |
| ·试验蛋鸡 | 第42页 |
| ·抗原与试剂 | 第42页 |
| ·抗原 | 第42页 |
| ·免疫佐剂 | 第42页 |
| ·其他试剂 | 第42页 |
| ·主要化学试剂配制 | 第42-43页 |
| ·ELISA试剂 | 第42页 |
| ·0.01M PBS(pH7.2) | 第42-43页 |
| ·蛋鸡的免疫 | 第43页 |
| ·卵黄抗体的分离及纯化 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第43-44页 |
| ·间接ELISA法检测特异性IgY抗体效价的建立 | 第44页 |
| ·包被抗原制备 | 第44页 |
| ·特异性IgY抗体消长规律及效价的检测 | 第44页 |
| ·免疫印迹(Western Blotting)分析卵黄抗体的反应性 | 第44-45页 |
| 2 结果 | 第45-48页 |
| ·IgY蛋白卵黄抗体的提取 | 第45页 |
| ·ELISA检测IgY抗体的效价及消长规律 | 第45-47页 |
| ·抗N蛋白IgY Western Blotting | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 基于特异性IgY抗体的IFA检测方法建立及体外中和效果研究 | 第49-56页 |
| 1 材料与方法 | 第49-51页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·病毒与细胞 | 第49页 |
| ·细胞培养基 | 第49页 |
| ·免疫学试剂 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-51页 |
| ·病毒扩繁 | 第49页 |
| ·病毒TCID_(50)的测定 | 第49-50页 |
| ·间接免疫荧光按1:50分别以三种封闭液稀释anti-PRRSV IgY及anti-NIgY | 第50页 |
| ·病毒中和试验 | 第50-51页 |
| 2 结果 | 第51-52页 |
| ·PRRSV毒株TCID_(50)测定结果 | 第51页 |
| ·特异性IgY抗体IFA检测条件的优化 | 第51-52页 |
| ·中和试验结果 | 第52页 |
| 3 讨论 | 第52-56页 |
| 创新点 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 | 第65页 |
