| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1.文献综述 | 第8-24页 |
| ·检验点控制系统 | 第9-12页 |
| ·有丝分裂检验点 | 第9-11页 |
| ·DNA损伤检验点 | 第11-12页 |
| ·ASH结构域蛋白KIAA1751与小头畸形病 | 第12-14页 |
| ·小头畸形病 | 第12-13页 |
| ·ASH结构域蛋白KIAA1751 | 第13-14页 |
| ·DNA损伤修复及其相关蛋白 | 第14-22页 |
| ·两条DNA损伤修复途径 | 第14-15页 |
| ·NHEJ的核心成员 | 第15-16页 |
| ·XLF在NHEJ中的作用 | 第16-18页 |
| ·XLF基因突变与2BN细胞 | 第18-20页 |
| ·Werner综合症缺陷蛋白WRN | 第20-22页 |
| ·硕士论文立题依据与总体设计 | 第22-24页 |
| ·研究背景 | 第22页 |
| ·研究内容与技术路线 | 第22-24页 |
| 2.材料和方法 | 第24-50页 |
| ·实验材料 | 第24-28页 |
| ·细胞系 | 第24页 |
| ·引物 | 第24-25页 |
| ·siRNA | 第25页 |
| ·抗体 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25-27页 |
| ·耗材 | 第27-28页 |
| ·实验仪器 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-50页 |
| ·细胞计数 | 第28-29页 |
| ·免疫荧光标记实验 | 第29-31页 |
| ·免疫沉淀 | 第31-33页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析 | 第33-35页 |
| ·RNA干扰 | 第35-36页 |
| ·质粒DNA电激转化 | 第36-37页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·PCR扩增目的基因(KIAA1751-GFP) | 第38页 |
| ·胶回收 | 第38-39页 |
| ·目的片段KIAA1751与载体pcDNA HA 3.1的单酶切 | 第39-40页 |
| ·酶切产物酚仿抽提 | 第40页 |
| ·DNA纯化回收 | 第40-41页 |
| ·目的片段与载体片段的连接 | 第41页 |
| ·连接产物热激转化 | 第41页 |
| ·菌液PCR鉴定与测序 | 第41-42页 |
| ·质粒转染 | 第42-43页 |
| ·用G418筛选稳定转染的细胞 | 第43-44页 |
| ·双荧光报告实验 | 第44页 |
| ·流式细胞分析 | 第44-46页 |
| ·染色质免疫沉淀 | 第46-50页 |
| 3.结果与分析 | 第50-61页 |
| ·对含有ASH结构域的蛋白KIAA1751的研究 | 第50-55页 |
| ·内源KIAA1751在HeLa细胞内的定位 | 第50页 |
| ·两种质粒的构建 | 第50-52页 |
| ·外源KIAA1751在HeLa细胞内的定位 | 第52-53页 |
| ·siRNA对HeLa细胞中内源KIAA1751表达的抑制 | 第53-54页 |
| ·流式细胞技术检测内源KIAA1751的缺失对细胞周期的影响 | 第54-55页 |
| ·对NHEJ蛋白XLF的研究 | 第55-61页 |
| ·siRNA对U2OS细胞内XLF和WRN表达的抑制 | 第55-57页 |
| ·稳定表达抗siRNA抑制型XLF的细胞株 | 第57-58页 |
| ·XLF和WRN对XLF基因的启动子活性有正调控作用 | 第58-59页 |
| ·在U2OS细胞系中,XLF自身与WRN均可以结合在XLF基因的启动子上 | 第59-61页 |
| 4.讨论 | 第61-66页 |
| ·含有ASH结构域的蛋白KIAA1751在细胞周期中的作用 | 第61-63页 |
| ·对NHEJ核心因子XLF与RecQ解旋酶家族成员WRN在细胞内相互作用的研究 | 第63-66页 |
| 5.结论 | 第66-67页 |
| ·对ASH结构域蛋白KIAA1751的研究 | 第66页 |
| ·对NHEJ核心蛋白XLF和RecQ家族成员WRN的研究 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
