摘要 | 第1-8页 |
ABSTRACT | 第8-11页 |
引言 | 第11-15页 |
第一部分 HSP70L1 的研究背景 | 第11-12页 |
第二部分 C-ABL 酪氨酸激酶的研究背景 | 第12-14页 |
1. c-Abl 酪氨酸激酶的结构 | 第12页 |
2. c-Abl 酪氨酸激酶的功能 | 第12-14页 |
第三部分 研究目的、思路及意义 | 第14-15页 |
材料与方法 | 第15-31页 |
1. 细胞株、菌株、及质粒 | 第15页 |
2. 分子生物学工具酶 | 第15页 |
3. 实验动物及其饲养条件 | 第15页 |
4. 主要试剂 | 第15-16页 |
5. 主要仪器 | 第16-17页 |
6. 常用试剂的配制 | 第17-18页 |
7. HSP70L1 全长基因的获得 | 第18页 |
8. 引物合成、载体构建及测序 | 第18-23页 |
9. HSP70L1 重组蛋白的原核表达与纯化 | 第23-24页 |
10. 兔HSP70L1 抗人多克隆抗体的制备 | 第24-25页 |
11. 转染质粒的制备 | 第25-26页 |
12. 细胞培养、冻存与转染 | 第26页 |
13. 免疫沉淀(IMMUNOPRECIPITATION, IP)与免疫印迹(IMMUNOBLOT, IB) | 第26-27页 |
14. 体外结合实验与FAR WESTERN实验 | 第27-28页 |
15. 细胞中总RNA 的提取及RT-PCR | 第28-29页 |
16. HSP70L1 RNAI 稳定细胞株的培养 | 第29页 |
17. 流式细胞技术检测细胞凋亡率 | 第29页 |
18. MTT 法细胞增殖实验 | 第29页 |
19. 细胞侵袭能力分析实验 | 第29-30页 |
20. 细胞同步化和周期分析 | 第30页 |
21. 其它 | 第30-31页 |
结果 | 第31-50页 |
1. HSP70L1 重组蛋白的原核表达和纯化 | 第31-32页 |
2. 兔抗人HSP70L1 的多克隆抗体的制备和鉴定 | 第32-33页 |
3. HSP70L1 在不同的细胞系中的表达 | 第33-34页 |
4. HSP70L1 能够形成同源二聚体 | 第34-35页 |
5. K562、HELA 细胞的HSP70L1 RNAI稳定细胞系的建立 | 第35-36页 |
6. HSP70L1 通过周期调控调节细胞增殖 | 第36-38页 |
7. HSP70L1 与周期蛋白相互作用调控细胞周期 | 第38-40页 |
8. HSP70L1 影响HELA细胞的侵袭能力 | 第40-41页 |
9. HSP70L1 在药物诱导的凋亡中起不同作用 | 第41-44页 |
10. HSP70L1 与C-ABL 相互作用 | 第44-46页 |
11. HSP70L1 与C-ABL 结合位点的确定 | 第46-48页 |
12. C-ABL对HSP70L1 在抗顺铂诱导凋亡作用的影响 | 第48-49页 |
13. HSP70L1 与其他蛋白的相互作用 | 第49-50页 |
讨论 | 第50-55页 |
1. HSP70L1 能够形成二聚体 | 第50页 |
2. HSP70L1 促进细胞增殖 | 第50-51页 |
3. HSP70L1 与DNA 损伤引起的G2/M 期阻滞相关 | 第51-52页 |
4. HSP70L1 与细胞凋亡相关 | 第52-53页 |
5. HSP70L1 抑制肿瘤细胞侵袭能力 | 第53页 |
6. C-ABL与HSP70L1 存在相互作用并影响其功能 | 第53-54页 |
7. HSP70L1 与其他蛋白相互作用及其可能的生物功能 | 第54-55页 |
结论 | 第55-56页 |
参考文献 | 第56-62页 |
附录一 测序报告 | 第62-66页 |
缩略词表 | 第66-67页 |
简历 | 第67-68页 |
致谢 | 第68页 |