| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-14页 |
| 第一部分 Flt-1胞外Ⅲ区基因的克隆及表达 | 第14-34页 |
| 一、实验材料 | 第14-15页 |
| ·主要实验仪器 | 第14页 |
| ·主要实验试剂 | 第14页 |
| ·各种酶、引物以及Marker | 第14-15页 |
| ·菌株、载体和细胞 | 第15页 |
| 二、实验方法 | 第15-27页 |
| ·Flt-1胞外Ⅲ区基因的克隆 | 第15-19页 |
| ·Flt-1胞外Ⅲ区蛋白的表达及纯化 | 第19-25页 |
| ·Flt-1胞外Ⅲ区蛋白的活性检测 | 第25-27页 |
| 三、实验结果 | 第27-34页 |
| ·利用引物PN.O:1和PN.O:5PCR扩增Flt-1 Ⅱ-Ⅲ区 | 第27-28页 |
| ·利用引物PN.O:3和PN.O:5扩增Flt-1胞外Ⅲ区基因 | 第28页 |
| ·Flt-1 Ⅱ-Ⅲ、Flt-1胞外Ⅲ区基因扩增产物的回收 | 第28页 |
| ·pAYZFlt-1Ⅲ表达载体的构建 | 第28-29页 |
| ·pAYZFlt-1Ⅲ的诱导表达 | 第29-30页 |
| ·Flt-1胞外Ⅲ区蛋白结合VEGF165活性分析 | 第30-31页 |
| ·损伤愈合试验 | 第31-32页 |
| ·Transwell检测Flt-1胞外Ⅲ区蛋白抑制HUVECs趋化性 | 第32-34页 |
| 第二部分 单克隆抗体的制备及其活性检测 | 第34-65页 |
| 1.实验材料 | 第36-37页 |
| ·细胞系与细胞培养 | 第36页 |
| ·实验动物 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·仪器 | 第36-37页 |
| 2.实验方法 | 第37-47页 |
| ·基础免疫动物 | 第37页 |
| ·ELlSA方法测定血清效价 | 第37-38页 |
| ·经脾加强免疫 | 第38页 |
| ·融合前准备 | 第38-39页 |
| ·细胞融合 | 第39-40页 |
| ·杂交瘤抗体检测及阳性克隆筛选 | 第40-41页 |
| ·杂交瘤的克隆化和冻存 | 第41-42页 |
| ·大量制备单克隆抗体(采用动物体内诱生法): | 第42-45页 |
| ·单克隆抗体特性的检测 | 第45-47页 |
| 3 实验结果 | 第47-65页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第47-61页 |
| ·腹水的纯化 | 第61-62页 |
| ·腹水抗体纯化后蛋白浓度的测定及SDA-PAGE凝胶电泳分析 | 第62-63页 |
| ·单克隆抗体亚型的鉴定 | 第63页 |
| ·单克隆抗体结合抗原的特异性 | 第63-64页 |
| ·单克隆抗体与抗原的亲和常数 | 第64页 |
| ·抗Flt-1Ⅲ区单克隆抗体与K562/AO2细胞的结合活性 | 第64-65页 |
| 讨论 | 第65-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-82页 |
| 附录一:英文缩略词汇表 | 第82-84页 |
| 附录二:溶液配制 | 第84-88页 |
| 综述 血管新生抑制剂的研究进展 | 第88-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 附录 | 第104页 |
