内容提要 | 第1-11页 |
英文缩略词 | 第11-13页 |
前言 | 第13-14页 |
第1章 文献综述 | 第14-37页 |
·线粒体医学 | 第14-29页 |
·线粒体的一般结构与特点 | 第14-15页 |
·线粒体遗传学 | 第15-21页 |
·线粒体DNA(mtDNA)的结构 | 第15页 |
·线粒体遗传学特征 | 第15-17页 |
·母系遗传 | 第16页 |
·异质性和突变负荷 | 第16页 |
·阈值效应 | 第16页 |
·“瓶颈”和随机分配 | 第16-17页 |
·高突变率 | 第17页 |
·mtDNA的复制及转录 | 第17-19页 |
·mtDNA的复制 | 第17-18页 |
·mtDNA转录的起始 | 第18-19页 |
·mtDNA转录的延伸 | 第19页 |
·mtDNA转录的终止 | 第19页 |
·mtDNA与遗传性疾病 | 第19-20页 |
·mtDNA突变与肿瘤 | 第20-21页 |
·线粒体与电离辐射 | 第21-23页 |
·电离辐射对线粒体的直接损伤 | 第21页 |
·电离辐射对线粒体的间接损伤 | 第21-22页 |
·线粒体基因组与辐射损伤的关系 | 第22-23页 |
·辐射引起mtDNA突变 | 第22-23页 |
·线粒体基因组与辐射敏感性 | 第23页 |
·线粒体DNA和辐射剂量 | 第23页 |
·线粒体与细胞凋亡 | 第23-29页 |
·细胞凋亡的基本特征 | 第23-24页 |
·细胞凋亡的检测手段 | 第24-25页 |
·形态学方法 | 第24页 |
·DNA断裂 | 第24-25页 |
·线粒体膜通透性改变是凋亡早期事件 | 第25-27页 |
·凋亡相关的线粒体膜间蛋白发挥重要作用 | 第27-29页 |
·Cyt c | 第27页 |
·Bcl-2/Bax | 第27-28页 |
·caspases | 第28页 |
·凋亡诱导因子(AIF) | 第28页 |
·Smac/DIABLO | 第28-29页 |
·睾丸生精细胞凋亡与电离辐射 | 第29-35页 |
·睾丸的形态学结构 | 第29-30页 |
·睾丸生精细胞凋亡的调控 | 第30-33页 |
·睾丸生精细胞凋亡的基因调控 | 第30-31页 |
·Bcl-2 基因家族 | 第30-31页 |
·p53 基因 | 第31页 |
·HSPs家族 | 第31页 |
·睾丸生精细胞凋亡的死亡受体途径 | 第31-32页 |
·睾丸生精细胞凋亡的线粒体途径 | 第32-33页 |
·睾丸生精细胞凋亡与电离辐射 | 第33-35页 |
·辐射性细胞凋亡的反应阶段 | 第33页 |
·引发性刺激 | 第33页 |
·滞后调节 | 第33页 |
·凋亡反应 | 第33页 |
·辐射诱发细胞凋亡的影响因素 | 第33-34页 |
·线性能量传递 | 第33页 |
·氧 | 第33页 |
·辐射剂量与剂量率 | 第33-34页 |
·电离辐射诱导睾丸生精细胞凋亡的规律及遗传学意义 | 第34-35页 |
·展望 | 第35-37页 |
第2章 材料与方法 | 第37-55页 |
·主要试剂与器材 | 第37-39页 |
·主要试剂 | 第37-39页 |
·主要器材 | 第39页 |
·主要仪器 | 第39-40页 |
·实验动物 | 第40页 |
·照射与分组 | 第40页 |
·照射条件 | 第40页 |
·实验分组与照射 | 第40页 |
·原位末端标记术(TUNEL)检测小鼠睾丸生精细胞凋亡 | 第40-43页 |
·主要液体配制 | 第41-42页 |
·载玻片处理 | 第42页 |
·组织标本制备 | 第42页 |
·TUNEL反应 | 第42-43页 |
·形态学定量观察 | 第43页 |
·小鼠睾丸生精细胞超微结构的变化 | 第43页 |
·小鼠睾丸组织中Na~+-K-~+ 与Ca~(2+)-ATP酶活性的检测 | 第43-44页 |
·主要液体配制 | 第43-44页 |
·组织匀浆的制备 | 第44页 |
·组织蛋白定量 | 第44页 |
·Na~+-K~+- 与Ca~(2+)-ATP酶活性试剂盒检测 | 第44页 |
·小鼠睾丸组织中NO含量和NOS活性的变化 | 第44-45页 |
·NO试剂盒检测小鼠睾丸组织中NO含量的变化 | 第44-45页 |
·NOS试剂盒检测小鼠睾丸组织中NOS活性的变化 | 第45页 |
·小鼠睾丸组织中线粒体相关功能指标的变化 | 第45-46页 |
·小鼠睾丸单细胞悬液的制备 | 第45页 |
·小鼠睾丸细胞中ROS含量的变化 | 第45-46页 |
·小鼠睾丸细胞中线粒体膜电位(Δψm)的变化 | 第46页 |
·小鼠睾丸细胞中[Ca~(2+)]i的变化 | 第46页 |
·小鼠睾丸组织中相关凋亡基因mRNA表达 | 第46-50页 |
·小鼠睾丸组织中总RNA的提取 | 第46-47页 |
·RNA质量的鉴定 | 第47页 |
·cDNA的合成 | 第47页 |
·引物的设计及合成 | 第47-48页 |
·Real time PCR | 第48-50页 |
·PCR产物的确定分析 | 第50页 |
·小鼠睾丸组织中相关凋亡基因蛋白的表达 | 第50-54页 |
·流式细胞术检测小鼠睾丸细胞中Cyt c与caspase-3 蛋白表达 | 第50-51页 |
·免疫组织化学检测小鼠睾丸生精细胞中Cyt c、caspase-9、caspase-3 和AIF蛋白表达 | 第51-52页 |
·载玻片处理及组织标本的制备 | 第51页 |
·抗原的修复 | 第51页 |
·免疫组织化学 | 第51-52页 |
·图像分析仪定量分析 | 第52页 |
·Western blot 检测睾丸组织中 Cyt c、caspase-9、caspase-3 和 AIF 蛋白表达 | 第52-54页 |
·蛋白的提取 | 第52页 |
·蛋白质浓度的测定 | 第52页 |
·Western blotting | 第52-54页 |
·实验试剂 | 第52-53页 |
·凝胶的制备 | 第53页 |
·样品制备、加样及电泳 | 第53页 |
·转膜及封闭 | 第53页 |
·抗体的反应 | 第53-54页 |
·化学发光、显影、定影、照相分析 | 第54页 |
·统计学方法 | 第54-55页 |
第3章 实验结果 | 第55-81页 |
·LDR诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的规律 | 第55-57页 |
·0.075 Gy X射线全身照射小鼠后睾丸生精细胞凋亡变化 | 第55-56页 |
·LDR后12 h小鼠睾丸生精细胞凋亡的变化 | 第56-57页 |
·LDR后小鼠睾丸细胞中线粒体结构与功能的变化 | 第57-63页 |
·LDR后小鼠睾丸生精细胞线粒体超微结构的改变 | 第57-58页 |
·LDR后小鼠睾丸细胞中线粒体膜通透性及钙离子稳态的变化 | 第58-59页 |
·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸细胞中Δψm及[Ca~(2+)]i的变化 | 第58页 |
·LDR后 12 h小鼠睾丸细胞中Δψm及[Ca~(2+)]i的变化 | 第58-59页 |
·LDR后小鼠睾丸组织中ATP酶活性的变化 | 第59-61页 |
·0.075 Gy X 射线照射小鼠睾丸组织中ATP酶活性的变化 | 第59-60页 |
·LDR后12 h小鼠睾丸组织中ATP酶活性的变化 | 第60-61页 |
·LDR后小鼠睾丸细胞中ROS及睾丸组织中NO含量、NOS活性的变化 | 第61-63页 |
·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸细胞ROS及睾丸组织NO含量、NOS活性的变化 | 第61-62页 |
·LDR后12 h小鼠睾丸细胞中ROS及组织中NO含量、NOS活性的变化 | 第62-63页 |
·LDR后小鼠睾丸组织凋亡相关基因mRNA的表达 | 第63-70页 |
·标准曲线和线性范围 | 第63页 |
·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸组织中Cyt c、caspase-3 和AIF mRNA的表达 | 第63-67页 |
·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸组织中GAPDH mRNA扩增结果 | 第63-64页 |
·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸组织中Cyt c mRNA的表达 | 第64-65页 |
·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸组织中caspase-3 mRNA的表达 | 第65-66页 |
·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸组织中AIF mRNA的表达 | 第66-67页 |
·LDR后12 h小鼠睾丸组织中Cyt c、caspase-3 和AIF mRNA的表达 | 第67-68页 |
·LDR后12 h小鼠睾丸组织中GAPDH mRNA扩增结果 | 第67-68页 |
·LDR后12 h小鼠睾丸组织中Cyt c mRNA的表达 | 第68页 |
·LDR后12 h小鼠睾丸组织中caspase-3 mRNA的表达 | 第68-69页 |
·LDR后12 h小鼠睾丸组织中AIF mRNA的表达 | 第69-70页 |
·LDR后小鼠睾丸中Cyt c、caspase-3、caspase-9 与AIF蛋白的表达 | 第70-81页 |
·LDR后小鼠睾丸中Cyt c蛋白的表达 | 第70-75页 |
·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸中Cyt c蛋白的表达 | 第70-73页 |
·LDR后12 h小鼠睾丸中Cyt c蛋白的表达 | 第73-75页 |
·LDR后小鼠睾丸中caspase-9 蛋白的表达 | 第75-77页 |
·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸中caspase-9 蛋白的表达 | 第75-76页 |
·LDR后12 h小鼠睾丸中caspase-9 蛋白的表达 | 第76-77页 |
·LDR后12 h小鼠睾丸中caspase-3 蛋白的表达 | 第77-79页 |
·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸中caspase-3 蛋白的表达 | 第77-78页 |
·LDR后12 h小鼠睾丸中caspase-3 蛋白的表达 | 第78-79页 |
·LDR后小鼠睾丸中AIF蛋白的表达 | 第79-81页 |
·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸细胞中AIF蛋白的表达 | 第79-80页 |
·LDR后12 h小鼠睾丸中AIF蛋白的表达 | 第80-81页 |
第4章 讨论 | 第81-90页 |
·方法学问题 | 第81-84页 |
·细胞凋亡的检测 | 第81-83页 |
·Real time PCR方法的探讨 | 第83-84页 |
·低剂量电离辐射对小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响 | 第84-85页 |
·低剂量电离辐射对小鼠睾丸线粒体结构和功能的改变 | 第85-87页 |
·细胞色素c凋亡调控的主导地位 | 第87-88页 |
·AIF独特的调控机制 | 第88-90页 |
结论 | 第90-91页 |
参考文献 | 第91-100页 |
附图 | 第100-105页 |
攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果 | 第105-108页 |
致谢 | 第108-109页 |
中文摘要 | 第109-114页 |
ABSTRACT | 第114-120页 |