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线粒体调控低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的机制

内容提要第1-11页
英文缩略词第11-13页
前言第13-14页
第1章 文献综述第14-37页
   ·线粒体医学第14-29页
     ·线粒体的一般结构与特点第14-15页
     ·线粒体遗传学第15-21页
       ·线粒体DNA(mtDNA)的结构第15页
       ·线粒体遗传学特征第15-17页
         ·母系遗传第16页
         ·异质性和突变负荷第16页
         ·阈值效应第16页
         ·“瓶颈”和随机分配第16-17页
         ·高突变率第17页
       ·mtDNA的复制及转录第17-19页
         ·mtDNA的复制第17-18页
         ·mtDNA转录的起始第18-19页
         ·mtDNA转录的延伸第19页
         ·mtDNA转录的终止第19页
       ·mtDNA与遗传性疾病第19-20页
       ·mtDNA突变与肿瘤第20-21页
     ·线粒体与电离辐射第21-23页
       ·电离辐射对线粒体的直接损伤第21页
       ·电离辐射对线粒体的间接损伤第21-22页
       ·线粒体基因组与辐射损伤的关系第22-23页
         ·辐射引起mtDNA突变第22-23页
         ·线粒体基因组与辐射敏感性第23页
         ·线粒体DNA和辐射剂量第23页
     ·线粒体与细胞凋亡第23-29页
       ·细胞凋亡的基本特征第23-24页
       ·细胞凋亡的检测手段第24-25页
         ·形态学方法第24页
         ·DNA断裂第24-25页
       ·线粒体膜通透性改变是凋亡早期事件第25-27页
       ·凋亡相关的线粒体膜间蛋白发挥重要作用第27-29页
         ·Cyt c第27页
         ·Bcl-2/Bax第27-28页
         ·caspases第28页
         ·凋亡诱导因子(AIF)第28页
         ·Smac/DIABLO第28-29页
   ·睾丸生精细胞凋亡与电离辐射第29-35页
     ·睾丸的形态学结构第29-30页
     ·睾丸生精细胞凋亡的调控第30-33页
       ·睾丸生精细胞凋亡的基因调控第30-31页
         ·Bcl-2 基因家族第30-31页
         ·p53 基因第31页
         ·HSPs家族第31页
       ·睾丸生精细胞凋亡的死亡受体途径第31-32页
       ·睾丸生精细胞凋亡的线粒体途径第32-33页
     ·睾丸生精细胞凋亡与电离辐射第33-35页
       ·辐射性细胞凋亡的反应阶段第33页
         ·引发性刺激第33页
         ·滞后调节第33页
         ·凋亡反应第33页
       ·辐射诱发细胞凋亡的影响因素第33-34页
         ·线性能量传递第33页
         ·氧第33页
         ·辐射剂量与剂量率第33-34页
       ·电离辐射诱导睾丸生精细胞凋亡的规律及遗传学意义第34-35页
   ·展望第35-37页
第2章 材料与方法第37-55页
   ·主要试剂与器材第37-39页
     ·主要试剂第37-39页
     ·主要器材第39页
   ·主要仪器第39-40页
   ·实验动物第40页
   ·照射与分组第40页
     ·照射条件第40页
     ·实验分组与照射第40页
   ·原位末端标记术(TUNEL)检测小鼠睾丸生精细胞凋亡第40-43页
     ·主要液体配制第41-42页
     ·载玻片处理第42页
     ·组织标本制备第42页
     ·TUNEL反应第42-43页
     ·形态学定量观察第43页
   ·小鼠睾丸生精细胞超微结构的变化第43页
   ·小鼠睾丸组织中Na~+-K-~+ 与Ca~(2+)-ATP酶活性的检测第43-44页
     ·主要液体配制第43-44页
     ·组织匀浆的制备第44页
     ·组织蛋白定量第44页
     ·Na~+-K~+- 与Ca~(2+)-ATP酶活性试剂盒检测第44页
   ·小鼠睾丸组织中NO含量和NOS活性的变化第44-45页
     ·NO试剂盒检测小鼠睾丸组织中NO含量的变化第44-45页
     ·NOS试剂盒检测小鼠睾丸组织中NOS活性的变化第45页
   ·小鼠睾丸组织中线粒体相关功能指标的变化第45-46页
     ·小鼠睾丸单细胞悬液的制备第45页
     ·小鼠睾丸细胞中ROS含量的变化第45-46页
     ·小鼠睾丸细胞中线粒体膜电位(Δψm)的变化第46页
     ·小鼠睾丸细胞中[Ca~(2+)]i的变化第46页
   ·小鼠睾丸组织中相关凋亡基因mRNA表达第46-50页
     ·小鼠睾丸组织中总RNA的提取第46-47页
     ·RNA质量的鉴定第47页
     ·cDNA的合成第47页
     ·引物的设计及合成第47-48页
     ·Real time PCR第48-50页
     ·PCR产物的确定分析第50页
   ·小鼠睾丸组织中相关凋亡基因蛋白的表达第50-54页
     ·流式细胞术检测小鼠睾丸细胞中Cyt c与caspase-3 蛋白表达第50-51页
     ·免疫组织化学检测小鼠睾丸生精细胞中Cyt c、caspase-9、caspase-3 和AIF蛋白表达第51-52页
       ·载玻片处理及组织标本的制备第51页
       ·抗原的修复第51页
       ·免疫组织化学第51-52页
       ·图像分析仪定量分析第52页
     ·Western blot 检测睾丸组织中 Cyt c、caspase-9、caspase-3 和 AIF 蛋白表达第52-54页
       ·蛋白的提取第52页
       ·蛋白质浓度的测定第52页
       ·Western blotting第52-54页
         ·实验试剂第52-53页
         ·凝胶的制备第53页
         ·样品制备、加样及电泳第53页
         ·转膜及封闭第53页
         ·抗体的反应第53-54页
         ·化学发光、显影、定影、照相分析第54页
   ·统计学方法第54-55页
第3章 实验结果第55-81页
   ·LDR诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的规律第55-57页
     ·0.075 Gy X射线全身照射小鼠后睾丸生精细胞凋亡变化第55-56页
     ·LDR后12 h小鼠睾丸生精细胞凋亡的变化第56-57页
   ·LDR后小鼠睾丸细胞中线粒体结构与功能的变化第57-63页
     ·LDR后小鼠睾丸生精细胞线粒体超微结构的改变第57-58页
     ·LDR后小鼠睾丸细胞中线粒体膜通透性及钙离子稳态的变化第58-59页
       ·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸细胞中Δψm及[Ca~(2+)]i的变化第58页
       ·LDR后 12 h小鼠睾丸细胞中Δψm及[Ca~(2+)]i的变化第58-59页
     ·LDR后小鼠睾丸组织中ATP酶活性的变化第59-61页
       ·0.075 Gy X 射线照射小鼠睾丸组织中ATP酶活性的变化第59-60页
       ·LDR后12 h小鼠睾丸组织中ATP酶活性的变化第60-61页
     ·LDR后小鼠睾丸细胞中ROS及睾丸组织中NO含量、NOS活性的变化第61-63页
       ·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸细胞ROS及睾丸组织NO含量、NOS活性的变化第61-62页
       ·LDR后12 h小鼠睾丸细胞中ROS及组织中NO含量、NOS活性的变化第62-63页
   ·LDR后小鼠睾丸组织凋亡相关基因mRNA的表达第63-70页
     ·标准曲线和线性范围第63页
     ·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸组织中Cyt c、caspase-3 和AIF mRNA的表达第63-67页
       ·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸组织中GAPDH mRNA扩增结果第63-64页
       ·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸组织中Cyt c mRNA的表达第64-65页
       ·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸组织中caspase-3 mRNA的表达第65-66页
       ·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸组织中AIF mRNA的表达第66-67页
     ·LDR后12 h小鼠睾丸组织中Cyt c、caspase-3 和AIF mRNA的表达第67-68页
       ·LDR后12 h小鼠睾丸组织中GAPDH mRNA扩增结果第67-68页
       ·LDR后12 h小鼠睾丸组织中Cyt c mRNA的表达第68页
     ·LDR后12 h小鼠睾丸组织中caspase-3 mRNA的表达第68-69页
     ·LDR后12 h小鼠睾丸组织中AIF mRNA的表达第69-70页
   ·LDR后小鼠睾丸中Cyt c、caspase-3、caspase-9 与AIF蛋白的表达第70-81页
     ·LDR后小鼠睾丸中Cyt c蛋白的表达第70-75页
       ·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸中Cyt c蛋白的表达第70-73页
       ·LDR后12 h小鼠睾丸中Cyt c蛋白的表达第73-75页
     ·LDR后小鼠睾丸中caspase-9 蛋白的表达第75-77页
       ·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸中caspase-9 蛋白的表达第75-76页
       ·LDR后12 h小鼠睾丸中caspase-9 蛋白的表达第76-77页
     ·LDR后12 h小鼠睾丸中caspase-3 蛋白的表达第77-79页
       ·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸中caspase-3 蛋白的表达第77-78页
       ·LDR后12 h小鼠睾丸中caspase-3 蛋白的表达第78-79页
     ·LDR后小鼠睾丸中AIF蛋白的表达第79-81页
       ·0.075 Gy X射线照射后小鼠睾丸细胞中AIF蛋白的表达第79-80页
       ·LDR后12 h小鼠睾丸中AIF蛋白的表达第80-81页
第4章 讨论第81-90页
   ·方法学问题第81-84页
     ·细胞凋亡的检测第81-83页
     ·Real time PCR方法的探讨第83-84页
   ·低剂量电离辐射对小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响第84-85页
   ·低剂量电离辐射对小鼠睾丸线粒体结构和功能的改变第85-87页
   ·细胞色素c凋亡调控的主导地位第87-88页
   ·AIF独特的调控机制第88-90页
结论第90-91页
参考文献第91-100页
附图第100-105页
攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果第105-108页
致谢第108-109页
中文摘要第109-114页
ABSTRACT第114-120页

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