| 摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 1 前言 | 第16-28页 |
| ·逆境胁迫对植物活性氧代谢的影响 | 第16-19页 |
| ·逆境胁迫对植物体内自由基代谢的影响 | 第16-17页 |
| ·逆境胁迫对植物体内H_2O_2 含量的影响 | 第17页 |
| ·活性氧与低温伤害 | 第17-18页 |
| ·活性氧与抗病 | 第18-19页 |
| ·交替氧化酶 | 第19-26页 |
| ·AOX 的结构 | 第20-22页 |
| ·AOX 基因的表达 | 第22页 |
| ·AOX 的功能 | 第22-26页 |
| ·AOX 具有维持代谢平衡的功能 | 第23页 |
| ·AOX 具有维持植物生长速率稳定的功能 | 第23-24页 |
| ·AOX 与光合作用有关 | 第24页 |
| ·AOX 具有清除活性氧的功能 | 第24-25页 |
| ·AOX 具有增强植物抵御逆境能力的功能 | 第25页 |
| ·AOX 有可能参与抗病信号转导途径 | 第25-26页 |
| ·AOX 的研究现状 | 第26页 |
| ·本课题研究目的与意义 | 第26-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-53页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·植物材料培养与处理 | 第28页 |
| ·原核表达载体和菌株 | 第28页 |
| ·实验引物 | 第28-29页 |
| ·其他材料 | 第29页 |
| ·试验方法 | 第29-53页 |
| ·三生烟草基因NtAOX1a 的克隆 | 第29-32页 |
| ·RNA 的提取 | 第29-31页 |
| ·利用RNeasy Plant Mini Kit 提取总RNA | 第29-30页 |
| ·利用TRIZOL 试剂盒提取RNA | 第30页 |
| ·异硫酸氰胍-酸性酚-LiCl 法 | 第30-31页 |
| ·RNA 反转录及cDNA 纯化 | 第31-32页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第32-37页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第32页 |
| ·转化 | 第32-33页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第33-35页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第33页 |
| ·大量提取质粒DNA | 第33-35页 |
| ·质粒微量提取方案 | 第35页 |
| ·对克隆载体的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·凝胶电泳中DNA 片段的回收 | 第36页 |
| ·Biometra 试剂盒法 | 第36页 |
| ·冻融法 | 第36页 |
| ·烟草NtAOX1a 全长表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·植物表达载体的转化 | 第37页 |
| ·根癌农杆菌LBA4404 感受态细胞的制备 | 第37页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第37页 |
| ·农杆菌介导转化烟草 | 第37-38页 |
| ·农杆菌的培养 | 第37页 |
| ·烟草的转化 | 第37-38页 |
| ·转基因植株的PCR 鉴定 | 第38-40页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第38-40页 |
| ·CTAB 法大量提取基因组DNA | 第38-39页 |
| ·小量法提取基因组DNA | 第39-40页 |
| ·Northern 杂交 | 第40-42页 |
| ·利用TRIZOL 试剂盒提取RNA | 第40页 |
| ·琼脂糖甲醛变性胶电泳 | 第40页 |
| ·转膜及烘膜 | 第40-41页 |
| ·探针合成 | 第41页 |
| ·预杂交及杂交 | 第41-42页 |
| ·原核表达及抗体制备 | 第42-45页 |
| ·试剂配制 | 第42页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第42页 |
| ·大肠杆菌BL21 原核表达的诱导 | 第42-43页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第43-44页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第44页 |
| ·抗体的制备 | 第44页 |
| ·抗血清效价的测定(试管微量沉淀法) | 第44-45页 |
| ·Western 杂交 | 第45-46页 |
| ·烟草叶片总蛋白质的提取 | 第45页 |
| ·半干法蛋白转移 | 第45-46页 |
| ·免疫检测 | 第46页 |
| ·显色法检测蛋白质 | 第46页 |
| ·氧电极法测定植物组织呼吸速率 | 第46-48页 |
| ·线粒体的提取 | 第46-47页 |
| ·仪器准备及安装 | 第47-48页 |
| ·样品测定 | 第48页 |
| ·H_2O_2 的化学染色 | 第48页 |
| ·H_2O_2 含量的测定 | 第48-49页 |
| ·原理 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| ·样品提取和测定 | 第48-49页 |
| ·抗氧化酶活力测定 | 第49-53页 |
| ·原理 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49-50页 |
| ·操作方法和步骤 | 第50-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-66页 |
| ·烟草NtAOX1a 序列的获得 | 第53-54页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第54-55页 |
| ·转基因烟草的获得 | 第55页 |
| ·T_0 代转基因烟草的PCR 鉴定 | 第55-56页 |
| ·T_1 代转基因烟草Northern blot 分析 | 第56-57页 |
| ·T_3 代转基因烟草Northern blot 分析 | 第57页 |
| ·原核表达载体的构建及抗体制备 | 第57-59页 |
| ·T_3 代转基因烟草Western blot 分析 | 第59页 |
| ·T_3 代转基因烟草呼吸测定 | 第59-60页 |
| ·低温下不同转基因烟草H_2O_2 含量的测定 | 第60-61页 |
| ·低温下转基因烟草中抗氧化酶活性的测定 | 第61-62页 |
| ·转基因烟草的病毒抗性分析 | 第62-64页 |
| ·氧化胁迫下转基因烟草种子萌发 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-80页 |
| 附录 | 第80-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第84-85页 |
