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鸡γ-干扰素基因克隆、表达及对禽流感灭活苗的免疫增强作用

中文摘要第1-9页
英文摘要第9-11页
1 前言第11-21页
   ·禽流感概述第11-17页
     ·禽流感流行现状第11-12页
     ·禽流感病毒分子生物学特征第12页
     ·基因组的结构及其编码蛋白的功能第12-15页
     ·禽流感疫苗第15-17页
   ·干扰素概述第17-20页
     ·IFN 分类及性质第17页
     ·IFN-γ产生及诱导剂第17-18页
     ·IFN-γ生物学活性第18-19页
     ·IFN-γ的应用第19-20页
   ·研究目的和意义第20-21页
2 材料与方法第21-35页
   ·试验材料第21-22页
     ·试验动物第21页
     ·病毒株第21页
     ·细胞株、菌株及载体第21页
     ·主要工具酶、抗体及分子生物学试剂盒第21页
     ·主要生化试剂第21-22页
     ·主要实验仪器设备第22页
   ·试验方法第22-34页
     ·鸡脾淋巴细胞总RNA 分离第22页
     ·鸡IFN-γ基因RT-PCR 扩增第22-23页
     ·PCR 扩增片段克隆第23-25页
     ·重组质粒鉴定第25-26页
     ·鸡IFN-γ基因重组表达载体构建第26-27页
     ·重组表达质粒鉴定第27-28页
     ·重组鸡IFN-γ在大肠杆菌表达系统中诱导表达第28-29页
     ·融合蛋白纯化第29页
     ·免疫印记分析第29页
     ·重组蛋白对VSV 感染细胞细胞病变的抑制第29-30页
     ·多克隆抗体制备第30页
     ·多克隆抗体鉴定第30-31页
     ·重组鸡γ干扰素对禽流感灭活苗的免疫增强效应第31-34页
   ·数据处理第34-35页
3 试验结果第35-53页
   ·鸡 IFN-γ 基因克隆与序列测定第35-37页
     ·鸡脾淋巴细胞总RNA 分离第35页
     ·RT-PCR 法扩增鸡IFN-γ基因序列第35-36页
     ·重组质粒pMD18-T-ChIFN-γ的鉴定第36-37页
     ·ChIFN-γ序列测定及分析第37页
   ·鸡 IFN-γ 基因在大肠杆菌中的表达及多克隆抗体制备第37-42页
     ·重组表达质粒鉴定第37-38页
     ·融合蛋白表达、鉴定与纯化第38-40页
     ·重组蛋白生物活性检测第40-41页
     ·多抗血清效价及特异性鉴定第41-42页
   ·禽流感HI 抗体水平测定第42页
   ·雏鸡免疫器官及血液T、B 淋巴细胞增殖功能动态变化第42-46页
     ·雏鸡胸腺T 淋巴细胞增殖功能动态变化第42-43页
     ·雏鸡脾脏T 淋巴细胞增殖功能动态变化第43-44页
     ·雏鸡血液T 淋巴细胞增殖功能动态变化第44页
     ·雏鸡脾脏B 淋巴细胞增殖功能动态变化第44-45页
     ·雏鸡血液B 淋巴细胞增殖功能动态变化第45-46页
   ·雏鸡免疫器官及血液不同亚型T 淋巴细胞数量动态变化第46-50页
     ·雏鸡免疫器官及血液CD4~+ T 淋巴细胞动态变化第46-48页
     ·雏鸡免疫器官及血液CD8~+ T 淋巴细胞动态变化第48-50页
   ·雏鸡体重增长测定第50页
   ·免疫器官指数测定第50-52页
   ·禽流感病毒感染雏鸡病理学观察第52页
   ·免疫攻毒保护率第52-53页
4 讨论第53-56页
   ·鸡 IFN-γ 基因克隆与表达第53-54页
     ·鸡IFN-γ基因克隆与序列第53页
     ·鸡IFN-γ基因表达、纯化与生物活性第53页
     ·多克隆抗体制备及鉴定第53-54页
   ·ChIFN-γ 对禽流感灭活苗免疫增强效应第54-56页
     ·雏鸡免疫后HI 抗体水平变化第54页
     ·雏鸡免疫后T、B 淋巴细胞增殖功能变化第54页
     ·雏鸡免疫后不同亚型T 细胞数量动态变化第54-55页
     ·雏鸡增重及免疫器官指数变化第55页
     ·禽流感病毒攻击雏鸡病理学变化及免疫保护率第55-56页
5 结论第56-57页
致谢第57-58页
参考文献第58-65页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第65页

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