| 中文摘要 | 第1-16页 |
| Abstract | 第16-21页 |
| 符号说明 | 第21-23页 |
| 前言 | 第23-37页 |
| 1 拓扑异构酶 | 第23-29页 |
| ·拓扑异构酶综述 | 第23-25页 |
| ·拓扑异构酶Ⅰ | 第25-27页 |
| ·拓扑异构酶Ⅱ | 第27-29页 |
| 2. 以拓扑异构酶为靶点的化疗药物 | 第29-32页 |
| ·拓扑异构酶Ⅰ抑制剂 | 第29-31页 |
| ·拓扑异构酶Ⅱ抑制剂 | 第31-32页 |
| 3. 拓扑异构酶抑制剂在应用过程中出现的问题 | 第32-37页 |
| ·拓扑异构酶靶向的药物多药耐药性的出现 | 第32-34页 |
| ·TopoⅡ靶向的药物可诱发急性白血病 | 第34-35页 |
| ·TopoⅡ毒剂阿霉素引起的心脏毒性 | 第35-37页 |
| 第一部分 Riccardin D诱导白血病细胞凋亡 | 第37-57页 |
| 1 材料 | 第37-43页 |
| ·化合物 | 第37页 |
| ·细胞株 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37-38页 |
| ·试剂配制 | 第38-42页 |
| ·仪器设备 | 第42-43页 |
| 2. 方法 | 第43-48页 |
| ·细胞培养 | 第43页 |
| ·肿瘤细胞生长抑制试验 | 第43-44页 |
| ·细胞核Hoechst33258染色试验 | 第44页 |
| ·FITC-Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡试验 | 第44-45页 |
| ·DNA Ladder检测细胞内核小体断裂试验 | 第45页 |
| ·Western-blotting检测凋亡相关蛋白试验 | 第45-46页 |
| ·RT-PCR检测凋亡相关基因试验 | 第46-48页 |
| ·数据处理 | 第48页 |
| 3. 结果 | 第48-53页 |
| ·Riccardin D化学结构 | 第48-49页 |
| ·Riccardin D抑制白血病细胞增殖 | 第49页 |
| ·Hoechst33258染色检测Riccardin D诱导白血病细胞凋亡 | 第49-50页 |
| ·FITC-Annexin V双染法检测Riccardin D诱导白血病细胞凋亡 | 第50-51页 |
| ·Riccardin D诱导白血病细胞DNA断裂 | 第51-52页 |
| ·Riccardin D诱导白血病细胞凋亡蛋白表达 | 第52页 |
| ·Riccardin D降低白血病细胞凋亡相关基因Bcl-2/Bax-α的比值 | 第52-53页 |
| ·Riccardin D通过线粒体途径诱导凋亡 | 第53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| 第二部分 Riccardin D靶向TOPOⅡ诱导凋亡 | 第57-69页 |
| 1 材料 | 第57-58页 |
| ·细胞株 | 第57页 |
| ·质粒 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| ·试剂配制 | 第57-58页 |
| ·仪器设备 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-61页 |
| ·体外Riccardin D对DNA拓扑异构酶Ⅰ活性的影响 | 第58页 |
| ·体外Riccardin D对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的影响 | 第58-59页 |
| ·Riccardin D对细胞内DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的影响 | 第59页 |
| ·实时定量PCR检测Riccardin D对DNA TopoⅡα基因表达的影响 | 第59页 |
| ·SPR检测Riccardin D与TopoⅡα的结合能力 | 第59-60页 |
| ·质粒扩增试验 | 第60-61页 |
| ·高表达TopoⅡα细胞系的构建 | 第61页 |
| ·数据处理 | 第61页 |
| 3 结果 | 第61-67页 |
| ·Riccardin D对DNA拓扑异构酶Ⅰ活性无影响 | 第61-62页 |
| ·Riccardin D体外明显抑制DNA拓扑异构酶Ⅱ活性 | 第62-63页 |
| ·Riccardin D抑制K562细胞内DNA拓扑异构酶Ⅱ活性 | 第63页 |
| ·Riccardin D降低DNA TopoⅡα基因水平 | 第63-64页 |
| ·SPR分析显示Riccardin D可与TopoⅡα结合 | 第64-65页 |
| ·Riccardin D对HL60/MX2的细胞增殖抑制作用 | 第65-66页 |
| ·Riccardin D对HL60/MX2凋亡诱导作用 | 第66页 |
| ·高表达TopoⅡα细胞系K562/topoⅡα内蛋白表达量的检测 | 第66页 |
| ·Riccardin D对K562/TopoⅡα的细胞增殖抑制作用 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 第三部分 Riccardin D体内外抑制非小细胞肺癌生长 | 第69-83页 |
| 1 材料 | 第69页 |
| ·细胞株 | 第69页 |
| ·动物 | 第69页 |
| ·试剂 | 第69页 |
| 2 方法 | 第69-74页 |
| ·肿瘤细胞生长抑制,Hoechst 33258及FITC-Annexin V/PI试验 | 第69页 |
| ·划痕试验 | 第69-70页 |
| ·重组基底膜侵袭与转移试验 | 第70-71页 |
| ·明胶酶(MMP-2,MMP-9)活性测定试验 | 第71-72页 |
| ·Riccardin D对H460接种裸鼠肿瘤生长抑制试验 | 第72页 |
| ·TUNEL法检测肿瘤组织内细胞凋亡试验 | 第72-73页 |
| ·Western blotting检测肿瘤及细胞内相关蛋白表达 | 第73-74页 |
| ·数据处理 | 第74页 |
| 3 结果 | 第74-80页 |
| ·Riccardin D抑制非小细胞肺癌细胞增殖 | 第74页 |
| ·Riccardin D诱导非小细胞肺癌细胞形态学改变 | 第74-75页 |
| ·Riccardin D诱导非小细胞肺癌细胞H460凋亡 | 第75页 |
| ·Riccardin D抑制非小细胞肺癌细胞A549迁移 | 第75-76页 |
| ·Riccardin D抑制非小细胞肺癌细胞A549侵袭 | 第76-77页 |
| ·Riccardin D对A549,H460分泌MMP-2和MMP-9活性的影响 | 第77页 |
| ·Riccardin D对H460肿瘤的生长抑制作用 | 第77-78页 |
| ·Riccardin D对H460肿瘤内细胞凋亡的诱导作用 | 第78-79页 |
| ·Riccardin D诱导H460细胞及肿瘤凋亡相关蛋白的表达 | 第79页 |
| ·Riccardin D抑制MMP-2,MMP-9,VEGF及Erk1/2蛋白表达 | 第79-80页 |
| 4 讨论 | 第80-83页 |
| 第四部分 Riccardin D逆转多药耐药作用研究 | 第83-92页 |
| 1 材料 | 第83页 |
| ·细胞株 | 第83页 |
| ·动物 | 第83页 |
| ·试剂 | 第83页 |
| 2 方法 | 第83-85页 |
| ·K562/A02细胞及H460/RT细胞耐药倍数测定试验 | 第83-84页 |
| ·肿瘤细胞生长抑制试验 | 第84页 |
| ·耐药细胞对阿霉素及紫杉醇敏感性试验 | 第84页 |
| ·Riccardin D与紫杉醇合用对H460/RT肿瘤生长抑制试验 | 第84-85页 |
| ·Western blotting及Real-time PCR检测耐药蛋白及基因表达水平 | 第85页 |
| ·数据处理 | 第85页 |
| 3. 结果 | 第85-91页 |
| ·K562/A02,H460/RT耐药倍数检测 | 第85页 |
| ·Riccardin D对阿霉素耐药株K562/A02的生长抑制作用 | 第85-86页 |
| ·Riccardin D对紫杉醇耐药株H460/RT的生长抑制作用 | 第86-87页 |
| ·Riccardin D与阿霉素合用对K562/A02的生长抑制作用 | 第87页 |
| ·Riccardin D与紫杉醇合用对H460/RT的生长抑制作用 | 第87-88页 |
| ·Riccardin D与紫杉醇合用对H460/RT肿瘤的生长抑制作用 | 第88-89页 |
| ·Riccardin D与紫杉醇合用对H460/RT肿瘤凋亡及耐药蛋白的作用 | 第89页 |
| ·Riccardin D对K562/A02内耐药蛋白P-gp的抑制作用 | 第89-90页 |
| ·Riccardin D降低K562/A02内耐药基因Mdrl水平 | 第90-91页 |
| 4 讨论 | 第91-92页 |
| 结论 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 攻读博士学位期间发表论文 | 第105-107页 |
| 英文论文 | 第107-118页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第118页 |
