| 摘要 | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 黑色素细胞简介 | 第10-12页 |
| 1.2 转录因子MITF与黑色素 | 第12-14页 |
| 1.2.1 MITF的蛋白异构体 | 第12页 |
| 1.2.2 MITF的保守性 | 第12-13页 |
| 1.2.3 MITF对黑素相关基因表达的调控 | 第13-14页 |
| 1.3 microRNA的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3.1 microRNA简介 | 第14页 |
| 1.3.2 miRNA的结构特点与合成过程 | 第14-15页 |
| 1.3.3 miRNA的功能 | 第15-16页 |
| 1.3.4 miRNA对毛色形成的调控 | 第16页 |
| 1.3.5 miRNA-148研究现状 | 第16页 |
| 1.4 转录组测序分析 | 第16-18页 |
| 1.4.1 基因测序技术的发展史 | 第17页 |
| 1.4.2 第二代测序技术的优点 | 第17-18页 |
| 1.5 本研究的内容和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 羊驼黑色素细胞体外培养及条件优化 | 第19-28页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂耗材 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-22页 |
| 2.2.1 细胞培养方法 | 第20页 |
| 2.2.2 细胞换液 | 第20页 |
| 2.2.3 细胞传代 | 第20-21页 |
| 2.2.4 细胞冻存 | 第21页 |
| 2.2.5 细胞计数与形态学细胞鉴定 | 第21页 |
| 2.2.6 羊驼黑色素细胞最佳培养条件的优化 | 第21-22页 |
| 2.2.6.1 最适细胞接种密度的试验 | 第21-22页 |
| 2.2.6.2 胰酶消化时间的优化 | 第22页 |
| 2.3 结果与分析 | 第22-26页 |
| 2.3.1 羊驼黑色素细胞培养结果 | 第22页 |
| 2.3.2 不同接种密度下的细胞生长曲线 | 第22-23页 |
| 2.3.3 不同接种密度下细胞生长情况比较 | 第23-26页 |
| 2.3.4 不同胰酶消化时间对细胞生长状况的影响 | 第26页 |
| 2.4 讨论与结论 | 第26-28页 |
| 第三章 miR-148对mitf基因的表达调控 | 第28-44页 |
| 3.1 材料 | 第28-30页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第28页 |
| 3.1.2 主要实验仪器及耗材 | 第28页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第28-29页 |
| 3.1.4 Western-blot相关试剂配制表 | 第29-30页 |
| 3.2 方法 | 第30-38页 |
| 3.2.1 细胞转染及转染浓度优化 | 第30页 |
| 3.2.2 Trizol裂解法提取羊驼黑色素细胞总RNA | 第30-31页 |
| 3.2.3 RNA浓度及纯度检测 | 第31页 |
| 3.2.4 RNA的逆转录 | 第31-33页 |
| 3.2.4.1 miRNA的逆转录 | 第31-32页 |
| 3.2.4.2 总RNA的逆转录 | 第32-33页 |
| 3.2.5 相关引物设计及测序分析 | 第33-34页 |
| 3.2.6 miR-148和mitf的相对实时荧光定量PCR | 第34-35页 |
| 3.2.7 细胞总蛋白的提取 | 第35-36页 |
| 3.2.8 Western-blot检测蛋白质的表达 | 第36-38页 |
| 3.2.9 数据统计分析 | 第38页 |
| 3.3 结果分析 | 第38-42页 |
| 3.3.1 RNA提取后电泳结果 | 第38-39页 |
| 3.3.2 mitf目的条带电泳结果 | 第39页 |
| 3.3.3 miR-148不同转染浓度的实时荧光定量PCR结果 | 第39-40页 |
| 3.3.4 miR-148的相对实时荧光定量PCR结果 | 第40页 |
| 3.3.5 mitf的相对实时荧光定量PCR结果 | 第40-41页 |
| 3.3.6 MITF的Western blot检测结果 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论与结论 | 第42-44页 |
| 3.4.1 细胞转染方法的选择 | 第42页 |
| 3.4.2 成熟体miRNA的选择 | 第42-43页 |
| 3.4.3 miR-148对MITF的调控作用 | 第43-44页 |
| 第四章 羊驼黑色素细胞的转录组测序分析 | 第44-50页 |
| 4.1 材料与方法 | 第44页 |
| 4.1.1 材料 | 第44页 |
| 4.1.2 方法 | 第44页 |
| 4.2 结果与分析 | 第44-49页 |
| 4.2.1 文库构建 | 第44-45页 |
| 4.2.2 结构分析 | 第45-46页 |
| 4.2.2.1 SSR分析 | 第45-46页 |
| 4.2.2.2 SNP分析 | 第46页 |
| 4.2.3 基因表达量分析 | 第46-47页 |
| 4.2.4 差异表达分析 | 第47页 |
| 4.2.5 黑色素相关基因的表达差异变化 | 第47-48页 |
| 4.2.6 差异表达基因的KEGG功能注释 | 第48-49页 |
| 4.3 讨论与结论 | 第49-50页 |
| 全文结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| Abstract | 第55-56页 |
| 致谢 | 第57页 |
