致谢 | 第1-5页 |
中文摘要 | 第5-6页 |
英文摘要 | 第6-8页 |
缩略词表 | 第8-11页 |
1.绪论 | 第11-14页 |
2.全人源胃癌噬菌体单链抗体库的构建 | 第14-44页 |
·前言 | 第14-15页 |
·实验材料 | 第15-19页 |
·主要仪器 | 第15页 |
·主要试剂和实验材料 | 第15-16页 |
·主要试剂配制 | 第16-19页 |
·实验方法 | 第19-36页 |
·胃癌病人外周血淋巴细胞(PBL)的分离 | 第19-20页 |
·TRIZOL法提取总细胞RNA | 第20-21页 |
·cDNA第一链的合成 | 第21页 |
·PCR扩增抗体重链和轻链可变区基因 | 第21-23页 |
·单链抗体可变区(scFv)片段的组装和全长扩增 | 第23-27页 |
·PCR产物和载体DNA的酶切消化 | 第27-29页 |
·连接产物转化E.coli TG1 | 第29-30页 |
·抗体库重组率和多样性分析 | 第30页 |
·噬菌体抗体的展示 | 第30-36页 |
·实验结果 | 第36-42页 |
·抗体重链和轻链可变区基因的PCR扩增 | 第36-38页 |
·单链抗体可变区片段(scFv)的组装和全长扩增 | 第38-39页 |
·单克隆质粒电泳图 | 第39-40页 |
·抗体基因的多样性分析 | 第40-42页 |
·讨论 | 第42-44页 |
·免疫球蛋白可变区基因的扩增 | 第42页 |
·建库载体的选择 | 第42-43页 |
·scFv的设计和构建 | 第43-44页 |
3.全人源胃癌噬菌体单链抗体库的初步筛选 | 第44-56页 |
·前言 | 第44-45页 |
·主要实验材料 | 第45-46页 |
·实验方法 | 第46-49页 |
·辅助噬菌体M13KO7的扩增 | 第46页 |
·scFv的噬菌体表面呈现及重组噬菌体抗体的制备 | 第46页 |
·噬菌体滴度的测定 | 第46页 |
·抗体库的富集筛选 | 第46-47页 |
·ELISA方法鉴定与MGC-803胞特异性结合的Phage-scFv | 第47-48页 |
·DNA序列分析 | 第48页 |
·scFv空间结构预测 | 第48-49页 |
·实验结果 | 第49-55页 |
·噬菌体抗体库富集筛选结果 | 第49页 |
·ELSIA验证第四轮淘筛后的单克隆抗体 | 第49-50页 |
·阳性克隆值最高的序列分析与空间结构预测 | 第50-55页 |
·讨论 | 第55-56页 |
4.结论 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-59页 |
综述 | 第59-72页 |
作者简历及在学期间所取得的科研成果 | 第72页 |