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全人源胃癌噬菌体单链抗体库的构建及其初步筛选

致谢第1-5页
中文摘要第5-6页
英文摘要第6-8页
缩略词表第8-11页
1.绪论第11-14页
2.全人源胃癌噬菌体单链抗体库的构建第14-44页
   ·前言第14-15页
   ·实验材料第15-19页
     ·主要仪器第15页
     ·主要试剂和实验材料第15-16页
     ·主要试剂配制第16-19页
   ·实验方法第19-36页
     ·胃癌病人外周血淋巴细胞(PBL)的分离第19-20页
     ·TRIZOL法提取总细胞RNA第20-21页
     ·cDNA第一链的合成第21页
     ·PCR扩增抗体重链和轻链可变区基因第21-23页
       ·单链抗体可变区(scFv)片段的组装和全长扩增第23-27页
     ·PCR产物和载体DNA的酶切消化第27-29页
     ·连接产物转化E.coli TG1第29-30页
     ·抗体库重组率和多样性分析第30页
     ·噬菌体抗体的展示第30-36页
   ·实验结果第36-42页
     ·抗体重链和轻链可变区基因的PCR扩增第36-38页
     ·单链抗体可变区片段(scFv)的组装和全长扩增第38-39页
     ·单克隆质粒电泳图第39-40页
     ·抗体基因的多样性分析第40-42页
   ·讨论第42-44页
     ·免疫球蛋白可变区基因的扩增第42页
     ·建库载体的选择第42-43页
     ·scFv的设计和构建第43-44页
3.全人源胃癌噬菌体单链抗体库的初步筛选第44-56页
   ·前言第44-45页
   ·主要实验材料第45-46页
   ·实验方法第46-49页
     ·辅助噬菌体M13KO7的扩增第46页
     ·scFv的噬菌体表面呈现及重组噬菌体抗体的制备第46页
     ·噬菌体滴度的测定第46页
     ·抗体库的富集筛选第46-47页
     ·ELISA方法鉴定与MGC-803胞特异性结合的Phage-scFv第47-48页
     ·DNA序列分析第48页
     ·scFv空间结构预测第48-49页
   ·实验结果第49-55页
     ·噬菌体抗体库富集筛选结果第49页
     ·ELSIA验证第四轮淘筛后的单克隆抗体第49-50页
     ·阳性克隆值最高的序列分析与空间结构预测第50-55页
   ·讨论第55-56页
4.结论第56-57页
参考文献第57-59页
综述第59-72页
作者简历及在学期间所取得的科研成果第72页

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