| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第10-20页 |
| 1.性腺相关的miRNA的研究进展 | 第10-15页 |
| 1.1 miRNA在生殖细胞中的研究 | 第10-11页 |
| 1.2 miRNA在卵巢中的研究 | 第11-14页 |
| 1.3 miRNA在精巢发育中的研究 | 第14-15页 |
| 2.miRNA-mRNA作用机制和研究方法 | 第15-18页 |
| 2.1 miRNA的形成及作用机制 | 第15-17页 |
| 2.2 miRNA的靶基因预测和验证 | 第17-18页 |
| 3.青鳉性腺的研究进展 | 第18-19页 |
| 4.本研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-36页 |
| 1.仪器与试剂 | 第20-23页 |
| 1.1 实验材料 | 第20页 |
| 1.2 试剂 | 第20-21页 |
| 1.3 仪器 | 第21-22页 |
| 1.4 数据分析 | 第22-23页 |
| 2.方法与步骤 | 第23-36页 |
| 2.1 SmallRNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2 小RNA的反转录和荧光定量PCR | 第24-25页 |
| 2.3 miR-202-5p和miR-26a靶基因的预测 | 第25页 |
| 2.4 成体青鳉性腺注射 | 第25-26页 |
| 2.5 总RNA的提取 | 第26页 |
| 2.6 总RNA质量和浓度检测 | 第26-27页 |
| 2.7 cDNA合成与半定量 | 第27页 |
| 2.8 qPCR验证 | 第27页 |
| 2.9 细胞复苏及传代 | 第27-28页 |
| 2.10 质粒构建 | 第28-32页 |
| 2.11 细胞转染 | 第32-33页 |
| 2.12 荧光素酶报告 | 第33-34页 |
| 2.13 冰冻切片 | 第34页 |
| 2.14 体外转录合成RNA探针 | 第34-35页 |
| 2.15 原位杂交 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与说明 | 第36-53页 |
| 1.miRNAs在青鳉胚胎时期的表达分析 | 第36-37页 |
| 2.miR-202-5p和miR-26a的靶基因预测 | 第37-38页 |
| 3.青鳉性腺中ddx3x和ddx3y的序列特征 | 第38-40页 |
| 4.ddx3x和ddx3y的靶miRNA预测 | 第40-41页 |
| 5.青鳉成体注射miR-202-5p的agomir&antagomir | 第41-43页 |
| 5.1 青鳉成体注射用鱼 | 第41页 |
| 5.2 潜在靶基因在青鳉性腺中的表达情况 | 第41-43页 |
| 6.荧光素酶报告分析 | 第43-46页 |
| 6.1 质粒图谱 | 第43页 |
| 6.2 质粒验证 | 第43-44页 |
| 6.3 转染效率检测 | 第44-45页 |
| 6.4 荧光素酶报告结果 | 第45-46页 |
| 7.靶基因ddx3x和ddx3y的克隆与组织差异表达分析 | 第46-51页 |
| 7.1 青鳉总RNA的鉴定 | 第46页 |
| 7.2 DDX3X和DDX3Y的种间比对以及同源性比较 | 第46-49页 |
| 7.3 青鳉中ddx3x和ddx3y基因组织表达特异性 | 第49-51页 |
| 8.青鳉中ddx3x和ddx3y性腺中的亚细胞定位 | 第51-53页 |
| 第四章 讨论 | 第53-55页 |
| 小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 附录Ⅰ | 第63-64页 |
| 硕士期间发表的文章 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
