| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 前言 | 第14-17页 |
| 第一章 MCF-7、MDA-MB-231细胞中雌二醇及其羟基代谢物分析方法的建立 | 第17-33页 |
| 1 仪器与材料材料 | 第17-19页 |
| 1.1 细胞株 | 第17页 |
| 1.2 实验试剂 | 第17-18页 |
| 1.3 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2 实验方法与结果 | 第19-30页 |
| 2.1 细胞培养 | 第19-20页 |
| 2.1.1 细胞复苏 | 第19页 |
| 2.1.2 细胞冻存 | 第19页 |
| 2.1.3 细胞传代 | 第19页 |
| 2.1.4 细胞计数 | 第19-20页 |
| 2.2 溶液的配制与生物样品的预处理 | 第20页 |
| 2.2.1 溶液的配制 | 第20页 |
| 2.2.2 细胞样品预处理 | 第20页 |
| 2.3 分析条件 | 第20-23页 |
| 2.3.1 色谱条件 | 第20-21页 |
| 2.3.2 质谱条件 | 第21-23页 |
| 2.4 细胞样品方法学考察 | 第23-30页 |
| 2.4.1 方法专属性 | 第23-25页 |
| 2.4.2 线性范围考察和定量下限 | 第25页 |
| 2.4.3 精密度和准确度 | 第25-27页 |
| 2.4.4 基质效应考察 | 第27-29页 |
| 2.4.5 稳定性考察 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-32页 |
| 3.1 色谱条件的建立 | 第30页 |
| 3.2 细胞样品处理方法的优化 | 第30-32页 |
| 4 本章小结 | 第32-33页 |
| 第二章 雌二醇及其羟基代谢物在MCF-7、MDA-MB-231细胞中摄取与消除研究 | 第33-44页 |
| 1 仪器与材料 | 第33-35页 |
| 1.1 细胞株 | 第33页 |
| 1.2 实验试剂 | 第33-34页 |
| 1.3 实验仪器 | 第34页 |
| 1.4 试剂配制 | 第34-35页 |
| 2 实验方法 | 第35-37页 |
| 2.1 实验药物溶液的配制 | 第35页 |
| 2.2 MTT法确定雌二醇给药浓度 | 第35-36页 |
| 2.3 雌二醇及其羟基代谢物在MCF-7、MDA-MB-231细胞中摄取与消除研究 | 第36页 |
| 2.3.1 雌二醇及其羟基代谢物在细胞内摄取实验 | 第36页 |
| 2.3.2 雌二醇及其羟基代谢物在细胞内消除实验 | 第36页 |
| 2.4 样品处理与检测 | 第36-37页 |
| 2.5 统计处理方法 | 第37页 |
| 3 实验结果 | 第37-42页 |
| 3.1 雌二醇对MCF-7、MDA-MB-231细胞活力的影响(MTT法) | 第37-38页 |
| 3.2 雌二醇及其羟基代谢物在MCF-7、MDA-MB-231细胞中摄取与消除研究 | 第38-42页 |
| 3.2.1 雌二醇及其羟基代谢物在细胞内摄取实验 | 第38-40页 |
| 3.2.2 雌二醇及其羟基代谢物在细胞内消除实验 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 5 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 雌二醇对MCF-7、MDA-MB-231细胞内CYP1A1、CYP1B基因和蛋白水平的影响 | 第44-56页 |
| 1 实验材料 | 第44-46页 |
| 1.1 细胞株 | 第44页 |
| 1.2 药材与试剂 | 第44-45页 |
| 1.3 实验仪器 | 第45-46页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-53页 |
| 2.1 荧光定量 RT-PCR 检测雌二醇对 MCF-7、MDA-MB-231 细胞中CYP1A1、CYP1B1 基因表达的影响 | 第46-49页 |
| 2.1.1 细胞给药 | 第46页 |
| 2.1.2 RNA的提取 | 第46-47页 |
| 2.1.3 RNA的含量测定 | 第47页 |
| 2.1.4 逆转录(RT) | 第47-48页 |
| 2.1.5 Real-time实时荧光定量PCR | 第48-49页 |
| 2.2 Western-blotting检测雌二醇对MCF-7、MDA-MB-231细胞中CYP1A1和CYP1B1蛋白的表达 | 第49-52页 |
| 2.2.1 细胞给药 | 第49页 |
| 2.2.2 细胞总蛋白的提取 | 第49-50页 |
| 2.2.3 蛋白浓度的测定 | 第50页 |
| 2.2.4 制胶与电泳 | 第50-52页 |
| 2.2.5 转膜 | 第52页 |
| 2.2.6 封闭 | 第52页 |
| 2.2.7 一抗孵育 | 第52页 |
| 2.2.8 二抗孵育 | 第52页 |
| 2.2.9 凝胶图像分析 | 第52页 |
| 2.3 统计处理方法 | 第52-53页 |
| 3 实验结果 | 第53-54页 |
| 3.1 雌二醇对MCF-7、MDA-MB-231细胞内CYP1A1、CYP1B的mRNA表达的影响 | 第53页 |
| 3.2 雌二醇对MCF-7、MDA-MB-231细胞内CYP1A1、CYP1B蛋白表达的影响 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 全文总结 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 综述 | 第62-74页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 个人简介 | 第74页 |
| 读学位期间发表的学术论文 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
