| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-20页 |
| 1.1 番茄晚疫病 | 第9-11页 |
| 1.1.1 番茄晚疫病概述 | 第9页 |
| 1.1.2 番茄病害防治手段 | 第9-10页 |
| 1.1.3 番茄晚疫病研究现状 | 第10-11页 |
| 1.2 miRNA概述 | 第11-16页 |
| 1.2.1 miRNA的生成过程 | 第11页 |
| 1.2.2 miRNA的作用机制 | 第11-13页 |
| 1.2.3 miRNA的功能 | 第13页 |
| 1.2.4 番茄与晚疫病菌互作过程中相关miRNA | 第13-14页 |
| 1.2.5 miR482的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.6 miRNA的研究策略 | 第15-16页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9系统 | 第16-18页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas9系统的基本结构和分类 | 第16-17页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas9系统(TypeII)的作用机制 | 第17页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas9系统中存在的问题 | 第17-18页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第18-20页 |
| 2 番茄miR482的生物信息学分析 | 第20-26页 |
| 2.1 实验所用数据库及软件 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-21页 |
| 2.2.1 miR482亚家族成员统计 | 第20页 |
| 2.2.2 miR482亚家族成员靶基因获取 | 第20-21页 |
| 2.2.3 pre-miR482b/c基因中CRISPR/Cas9靶点检测 | 第21页 |
| 2.3 实验结果 | 第21-23页 |
| 2.3.1 miR482亚家族成员序列信息 | 第21页 |
| 2.3.2 miR482亚家族成员的靶基因 | 第21-22页 |
| 2.3.3 pre-miR482b/c基因中的CRISPR/Cas9靶点 | 第22-23页 |
| 2.4 讨论 | 第23-25页 |
| 2.5 小结 | 第25-26页 |
| 3 miR482b/c基因的克隆及根癌农杆菌工程菌的构建 | 第26-43页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第26-27页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第26页 |
| 3.1.2 实验试剂及仪器 | 第26-27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-36页 |
| 3.2.1 番茄基因组DNA的提取 | 第27页 |
| 3.2.2 miR482b/c基因的克隆 | 第27-31页 |
| 3.2.3 pBI121-miR482c过表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 3.2.4 CRISPR/Cas9打靶载体的构建 | 第32-35页 |
| 3.2.5 根癌农杆菌工程菌的获得 | 第35-36页 |
| 3.3 实验结果 | 第36-42页 |
| 3.3.1 提取的番茄基因组DNA | 第36-37页 |
| 3.3.2 miR482b/c的克隆产物 | 第37-38页 |
| 3.3.3 pBI121-miR482c过表达载体 | 第38-40页 |
| 3.3.4 CRISPR/Cas9打靶载体 | 第40页 |
| 3.3.5 转化获得的根癌农杆菌工程菌 | 第40-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42页 |
| 3.5 小结 | 第42-43页 |
| 4 miR482b/c在番茄抗晚疫病中的功能分析 | 第43-59页 |
| 4.1 实验材料与试剂 | 第43-44页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.1.2 实验试剂及仪器 | 第43-44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-50页 |
| 4.2.1 miR482b/c在番茄中的瞬时表达 | 第44-47页 |
| 4.2.2 miR482b/c在番茄中的稳定表达株系构建 | 第47-48页 |
| 4.2.3 番茄再生植株目标基因的PCR检测 | 第48页 |
| 4.2.4 转基因植株的抗病性检测 | 第48-49页 |
| 4.2.5 转基因植株叶片的组织化学染色 | 第49-50页 |
| 4.3 实验结果 | 第50-56页 |
| 4.3.1 miR482b/c在番茄中的瞬时表达情况 | 第50-52页 |
| 4.3.2 稳定表达植株的分子验证结果 | 第52-53页 |
| 4.3.3 转基因株系中miR482b/c及其靶基因的表达量 | 第53-55页 |
| 4.3.4 转基因植株叶片中死细胞数量及活性氧的变化 | 第55-56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-58页 |
| 4.5 小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录A 实验中所用质粒图谱 | 第66-67页 |
| 附录B 实验中所用培养基配方 | 第67-68页 |
| 附录C miR482b和miR482c的基因序列 | 第68-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
