| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1 前言 | 第10页 |
| 2 软体动物免疫机制的研究 | 第10-14页 |
| ·软体动物免疫系统 | 第10-11页 |
| ·软体动物的体液免疫因子 | 第11-14页 |
| ·水解酶类 | 第11-12页 |
| ·氧化酶和抗氧化酶类 | 第12-13页 |
| ·凝集素 | 第13页 |
| ·抗菌肽 | 第13页 |
| ·溶血素及其它 | 第13-14页 |
| 3 精氨酸酶的研究进展 | 第14-17页 |
| ·精氨酸酶的性质与分布 | 第14页 |
| ·精氨酸酶缺乏与疾病的关系 | 第14-15页 |
| ·精氨酸酶的表达活性与功能 | 第15-16页 |
| ·精氨酸酶与肿瘤治疗 | 第16-17页 |
| 4 丝氨酸蛋白酶的研究进展 | 第17-19页 |
| ·丝氨酸蛋白酶的性质与分类 | 第17页 |
| ·氨酸蛋白酶的结构特征与功能 | 第17-19页 |
| ·丝氨酸蛋白酶的应用 | 第19页 |
| 5 研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 三角帆蚌精氨酸酶基因的克隆与组织差异表达 | 第20-43页 |
| 1 材料与方法 | 第20-27页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·药品与试剂 | 第20页 |
| ·质粒和菌株 | 第20-21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·实验引物 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-27页 |
| ·实验对象处理 | 第22页 |
| ·总RNA提取 | 第22页 |
| ·SMART cDNA的合成 | 第22-24页 |
| ·三角帆蚌精氨酸酶基因cDNA片段的扩增 | 第24-25页 |
| ·PCR扩增产物的回收与纯化 | 第25页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·目的片段的连接和转化 | 第26页 |
| ·序列分析 | 第26-27页 |
| ·系统发育树的构建 | 第27页 |
| ·精氨酸酶基因的组织表达差异 | 第27页 |
| 2 结果 | 第27-41页 |
| ·精氨酸酶基因全长扩增 | 第28-31页 |
| ·5’-RACE和3’-RACE扩增结果 | 第28页 |
| ·精氨酸酶基因拼接产物与分析 | 第28-31页 |
| ·精氨酸酶氨基酸序列分析 | 第31-40页 |
| ·氨基酸理化性质分析 | 第31-32页 |
| ·精氨酸酶信号肽预测 | 第32页 |
| ·精氨酸酶跨膜结构预测 | 第32-33页 |
| ·精氨酸酶二级结构预测 | 第33-34页 |
| ·精氨酸酶三级结构预测 | 第34-35页 |
| ·精氨酸酶氨基酸序列同源性分析 | 第35-39页 |
| ·精氨酸酶系统进化树的构建与分析 | 第39-40页 |
| ·精氨酸酶基因组织差异表达 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-42页 |
| 4 小结 | 第42-43页 |
| 第三章 三角帆蚌丝氨酸蛋白酶基因的克隆与组织差异表达 | 第43-62页 |
| 1 材料和方法 | 第43-47页 |
| ·材料 | 第43-45页 |
| ·实验动物 | 第43页 |
| ·药品与试剂 | 第43页 |
| ·质粒和菌株 | 第43-44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44页 |
| ·实验引物 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-47页 |
| ·实验对象处理 | 第45页 |
| ·总RNA提取 | 第45页 |
| ·SMART cDNA的合成 | 第45页 |
| ·三角帆蚌丝氨酸蛋白酶基因cDNA片段的扩增 | 第45-46页 |
| ·PCR扩增产物的回收与纯化 | 第46页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第46页 |
| ·目的片段的连接和转化 | 第46页 |
| ·序列分析 | 第46页 |
| ·系统发育树的构建 | 第46-47页 |
| ·丝氨酸蛋白酶基因的组织表达差异 | 第47页 |
| 2 结果 | 第47-59页 |
| ·丝氨酸蛋白酶基因全长扩增 | 第47-50页 |
| ·5’-RACE和3’-RACE扩增结果 | 第47-48页 |
| ·丝氨酸蛋白酶基因拼接产物与分析 | 第48-50页 |
| ·丝氨酸蛋白酶氨基酸序列分析 | 第50-58页 |
| ·氨基酸理化性质分析 | 第50-51页 |
| ·丝氨酸蛋白酶信号肽预测 | 第51-52页 |
| ·丝氨酸蛋白酶跨膜结构预测 | 第52-53页 |
| ·丝氨酸蛋白酶二级结构预测 | 第53-54页 |
| ·丝氨酸蛋白酶三级结构预测 | 第54-55页 |
| ·丝氨酸蛋白酶氨基酸序列同源性分析 | 第55-57页 |
| ·丝氨酸蛋白酶系统进化树的构建与分析 | 第57-58页 |
| ·丝氨酸蛋白酶基因组织差异表达 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| ·三角帆蚌丝氨酸蛋白酶的结构与功能 | 第59-60页 |
| ·三角帆蚌丝氨酸蛋白酶的组织表达差异 | 第60-61页 |
| 4 小结 | 第61-62页 |
| 第四章 三角帆蚌丝氨酸蛋白酶基因的原核表达 | 第62-70页 |
| 1 材料与方法 | 第62-66页 |
| ·材料 | 第62-63页 |
| ·主要仪器设备 | 第62页 |
| ·菌种及载体 | 第62页 |
| ·酶制剂及化学试剂 | 第62-63页 |
| ·实验方法 | 第63-66页 |
| ·肝脏总RNA提取及cDNA第一链的合成 | 第63页 |
| ·丝氨酸蛋白酶基因ORF区域的扩增 | 第63-64页 |
| ·原核表达载体质粒的小量提取 | 第64页 |
| ·带粘性末端目的基因ORF及质粒的制备 | 第64-65页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第65页 |
| ·原核表达载体的转化与鉴定 | 第65页 |
| ·重组质粒的诱导表达及SDS-PAGE鉴定 | 第65-66页 |
| 2 结果 | 第66-68页 |
| ·丝氨酸蛋白酶基因开放阅读框的扩增 | 第66页 |
| ·质粒提取与双酶切结果 | 第66-67页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第67页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳检测 | 第67-68页 |
| 3 讨论 | 第68-70页 |
| ·原核表达系统的选择 | 第68-69页 |
| ·原核表达载体的构建与诱导表达 | 第69页 |
| ·三角帆蚌丝氨酸蛋白酶原核表达研究展望 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 附录A | 第79-80页 |
| 附录B | 第80-82页 |
| 附录C | 第82-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 作者简介 | 第86页 |