| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第16-29页 |
| 1.1 禽流感病毒H9N2亚型介绍 | 第16-18页 |
| 1.1.1 禽流感病毒H9N2亚型简介 | 第16页 |
| 1.1.2 禽流感病毒H9N2亚型的抗原漂移 | 第16-17页 |
| 1.1.3 禽流感病毒H9N2亚型作为新型禽流感病毒的基因供体 | 第17-18页 |
| 1.1.4 禽流感病毒H9N2亚型在中国的流行情况 | 第18页 |
| 1.2 单链抗体介绍 | 第18-20页 |
| 1.2.1 单链抗体的特点 | 第18-19页 |
| 1.2.2 单链抗体的研究进展 | 第19页 |
| 1.2.3 单链抗体的应用 | 第19-20页 |
| 1.3 基因工程概述 | 第20页 |
| 1.4 HEK293细胞表达系统概述 | 第20-21页 |
| 1.5 大肠杆菌表达系统概述 | 第21页 |
| 1.6 超折叠绿色荧光蛋白概述 | 第21-22页 |
| 1.7 单链抗体在大肠杆菌中可溶性表达的研究进展 | 第22-27页 |
| 1.7.1 单链抗体在大肠杆菌细胞内可溶性表达的分子机理 | 第22页 |
| 1.7.2 大肠杆菌细胞内表达可溶性单链抗体概述 | 第22-23页 |
| 1.7.3 单链抗体在大肠杆菌细胞内的可溶性表达的一种方法 | 第23页 |
| 1.7.4 大肠杆菌周质中单链抗体二硫键形成的研究 | 第23-24页 |
| 1.7.5 大肠杆菌trxB和gor突变株细胞质中表达功能性单链抗体的研究 | 第24-25页 |
| 1.7.6 △ssDsbC在大肠杆菌中对于单链抗体二硫键形成的意义 | 第25-26页 |
| 1.7.7 在大肠杆菌中表达带有功能的可溶性单链抗体的一些讨论 | 第26-27页 |
| 1.8 本实验研究目的和研究内容 | 第27-29页 |
| 1.8.1 研究目的 | 第27-28页 |
| 1.8.2 研究内容 | 第28-29页 |
| 第2章 材料和方法 | 第29-52页 |
| 2.1 前言 | 第29-30页 |
| 2.2 实验材料 | 第30-33页 |
| 2.2.1 菌株和细胞系 | 第30页 |
| 2.2.2 质粒 | 第30-31页 |
| 2.2.3 仪器设备 | 第31页 |
| 2.2.4 试剂药品 | 第31-32页 |
| 2.2.5 培养基和实验溶液配制 | 第32-33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-52页 |
| 2.3.1 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第33-34页 |
| 2.3.2 禽流感H9N2亚型单链抗体基因合成 | 第34-38页 |
| 2.3.3 大肠杆菌的转化 | 第38页 |
| 2.3.4 融合蛋白表达质粒pET23a-sfGFP-scFv的构建 | 第38-40页 |
| 2.3.5 单链抗体表达质粒pET23a-scFv的构建 | 第40页 |
| 2.3.6 禽流感H9N2亚型PB2蛋白基因的合成及表达质粒的构建 | 第40-41页 |
| 2.3.7 手工提取质粒DNA | 第41-42页 |
| 2.3.8 琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物 | 第42页 |
| 2.3.9 琼脂糖凝胶电泳回收纯化DNA片段 | 第42-43页 |
| 2.3.10 PCR验证表达质粒重组子 | 第43-44页 |
| 2.3.11 禽流感H9N2亚型单链抗体的表达 | 第44页 |
| 2.3.12 大肠杆菌细胞质内可溶性单链抗体提取 | 第44-45页 |
| 2.3.13 大肠杆菌细胞外膜上单链抗体提取 | 第45页 |
| 2.3.14 H9N2 AIV scFv融合蛋白His纯化 | 第45-46页 |
| 2.3.15 HEK293T细胞培养 | 第46-47页 |
| 2.3.16 HEK293T细胞转染 | 第47-48页 |
| 2.3.17 HEK293T细胞全蛋白提取 | 第48页 |
| 2.3.18 SDS-PAGE分析重组蛋白 | 第48-49页 |
| 2.3.19 HEK293T细胞DAPI染色 | 第49页 |
| 2.3.20 免疫荧光实验 | 第49-50页 |
| 2.3.21 Western-Blot验证H9N2 AIV scFv结合PB2蛋白的免疫活性 | 第50-51页 |
| 2.3.22 Western-Blot验证HEK293T细胞表达H9N2 AIV PB2蛋白 | 第51-52页 |
| 第3章 结果与分析 | 第52-68页 |
| 3.1 禽流感H9N2亚型单链抗体表达质粒的构建 | 第52-53页 |
| 3.2 禽流感H9N2亚型单链抗体在大肠杆菌中的表达情况 | 第53-62页 |
| 3.2.1 培养温度37℃下诱导表达禽流感H9N2亚型单链抗体的结果 | 第53-55页 |
| 3.2.2 培养温度28℃下诱导表达禽流感H9N2亚型单链抗体的结果 | 第55-58页 |
| 3.2.3 培养温度18℃下诱导表达禽流感H9N2亚型单链抗体的结果 | 第58-62页 |
| 3.3 禽流感病毒H9N2亚型的PB2蛋白基因的表达质粒构建 | 第62页 |
| 3.4 sfGFP-H9N2 AIV scFv融合蛋白纯化 | 第62-63页 |
| 3.5 HEK293T细胞DAPI染色定位H9N2 AIV PB2-DsRed融合蛋白 | 第63-64页 |
| 3.6 sfGFP-H9N2scFv融合蛋白和H9N2 AIV PB2-DsRed融合蛋白免疫荧光实验 | 第64-65页 |
| 3.7 sfGFP-H9N2scFv融合蛋白和DsRed蛋白免疫荧光负对照实验 | 第65-66页 |
| 3.8 Western-Blot验证H9N2 AIV scFv结合PB2蛋白免疫反应 | 第66-68页 |
| 第4章 讨论与展望 | 第68-70页 |
| 4.1 讨论 | 第68页 |
| 4.2 结论 | 第68-69页 |
| 4.3 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
