| 缩略词 | 第8-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第13-21页 |
| 1 琯溪蜜柚果实粒化研究进展 | 第13-14页 |
| 2 木质素代谢途径中甲基转移酶的研究进展 | 第14-18页 |
| 2.1 木质素代谢中甲基转移酶的作用机理 | 第15-16页 |
| 2.2 木质素代谢中COMT催化底物研究 | 第16-17页 |
| 2.3 木质素代谢中COMT组织表达特性研究 | 第17-18页 |
| 3 COMT基因调节木质素合成研究 | 第18-19页 |
| 3.1 COMT活性的变化对木质素代谢的影响 | 第18页 |
| 3.2 COMT基因调节木质素合成研究 | 第18-19页 |
| 4 研究意义和研究内容 | 第19-21页 |
| 4.1 研究意义 | 第19页 |
| 4.2 研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章 cmCOMTs基因序列的克隆与分析 | 第21-44页 |
| 1 材料与方法 | 第21-24页 |
| 1.1 材料 | 第21页 |
| 1.2 方法 | 第21-23页 |
| 1.2.0 总RNA和DNA提取以及cDNA第一链的合成 | 第21页 |
| 1.2.1 引物的设计合成 | 第21-22页 |
| 1.2.2 cmCOMT编码区序列和DNA序列的克隆 | 第22-23页 |
| 1.2.3 目的片段的回收、克隆和测序 | 第23页 |
| 1.3 '琯溪蜜柚'粒化汁胞cmCOMTs基因生物信息学分析 | 第23-24页 |
| 2 结果与分析 | 第24-41页 |
| 2.1 '琯溪蜜柚'粒化汁胞总RNA和DNA的提取结果及质量检测 | 第24页 |
| 2.2 '琯溪蜜柚'粒化汁胞cmCOMTs基因cDNA和DNA序列的克隆 | 第24-31页 |
| 2.2.1 '琯溪蜜柚'粒化汁胞cmCOMT1基因cDNA和DNA序列的克隆 | 第24-26页 |
| 2.2.2 '琯溪蜜柚'粒化汁胞cmCOMT2基因cDNA和DNA序列的克隆 | 第26-27页 |
| 2.2.3 '琯溪蜜柚'粒化汁胞cmCOMT3基因cDNA和DNA序列的克隆 | 第27-29页 |
| 2.2.4 cmCOMTs基因家族成员的编码区与DNA序列比对分析 | 第29-31页 |
| 2.3 '琯溪蜜柚'粒化汁胞cmCOMTs基因生物信息学分析 | 第31-41页 |
| 2.3.1 '琯溪蜜柚'粒化汁胞cmCOMTs蛋白的理化性质分析 | 第31页 |
| 2.3.2 '琯溪蜜柚'粒化汁胞cmCOMTs蛋白的跨膜预测分析 | 第31-33页 |
| 2.3.3 '琯溪蜜柚'粒化汁胞cmCOMTs蛋白的信号肽预测分析 | 第33-34页 |
| 2.3.4 '琯溪蜜柚'粒化汁胞cmCOMTs蛋白的亚细胞定位分析 | 第34页 |
| 2.3.5 '琯溪蜜柚'粒化汁胞cmCOMTs蛋白的磷酸化位点分析 | 第34-36页 |
| 2.3.6 '琯溪蜜柚'粒化汁胞cmCOMTs蛋白卷曲螺旋结构预测与分析 | 第36页 |
| 2.3.7 '琯溪蜜柚'粒化汁胞cmCOMTs蛋白质亲疏水性预测 | 第36-37页 |
| 2.3.8 '琯溪蜜柚'粒化汁胞cmCOMTs蛋白二级结构预测分析 | 第37-38页 |
| 2.3.9 '琯溪蜜柚'粒化汁胞cmCOMTs蛋白三级结构预测分析 | 第38-39页 |
| 2.3.10 '琯溪蜜柚'粒化汁胞cmCOMTs基因保守区预测分析及进化树构建 | 第39-40页 |
| 2.3.11 '琯溪蜜袖'粒化汁胞cmCOMTs基因氨基酸序列比对分析 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-44页 |
| 3.1 '琯溪蜜柚'cmCOMTs基因的克隆与家族成员分析 | 第41-42页 |
| 3.2 '琯溪蜜柚'cmCOMTs基因DNA序列的差异对基因表达的影响 | 第42-44页 |
| 第三章 cmCOMTs基因在柚汁胞粒化过程中的表达分析 | 第44-49页 |
| 1 材料与方法 | 第44-45页 |
| 1.1 材料 | 第44页 |
| 1.1.1 试验材料 | 第44页 |
| 1.1.2 主要试剂及仪器 | 第44页 |
| 1.2 方法 | 第44-45页 |
| 1.2.1 RNA提取与质量检测 | 第44页 |
| 1.2.2 cDNA合成 | 第44页 |
| 1.2.3 实时荧光定量PCR引物的设计及合成 | 第44页 |
| 1.2.4 实时荧光定量PCR反应条件 | 第44-45页 |
| 1.2.5 实时荧光定量PCR检测与计算 | 第45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-47页 |
| 2.1 '琯溪蜜柚'汁胞cmCOMTs基因qPCR扩增效率和特异性分析 | 第45页 |
| 2.2 cmCOMTs基因的差异表达分析 | 第45-47页 |
| 2.2.1 cmCOMT1基因在汁胞不同时期和部位的定量表达分析 | 第45页 |
| 2.2.2 cmCOMT2基因在汁胞不同时期和部位的定量表达分析 | 第45-46页 |
| 2.2.3 cmCOMT3基因在汁胞不同时期和部位的定量表达分析 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 cmCOMT1基因的原核表达与质谱分析 | 第49-55页 |
| 1 材料与试剂 | 第49页 |
| 1.1 植物材料 | 第49页 |
| 1.2 菌种与载体 | 第49页 |
| 1.3 主要试剂及仪器 | 第49页 |
| 2 方法 | 第49-51页 |
| 2.1 pEASY-E1-cmCOMT1表达载体构建与鉴定 | 第49-50页 |
| 2.2 pEASY-E1-cmCOMT1的诱导表达 | 第50-51页 |
| 2.2.1 pEASY-E1-cmCOMT1质粒DNA的提取 | 第50页 |
| 2.2.2 重组阳性克隆的转化 | 第50页 |
| 2.2.3 目的基因的诱导表达及样品制备 | 第50-51页 |
| 2.3 表达产物的纯化与鉴定 | 第51页 |
| 2.3.1 填料的准备 | 第51页 |
| 2.3.2 样品的超声破碎 | 第51页 |
| 2.3.3 上样于洗脱 | 第51页 |
| 2.3.4 纯化后蛋白的检测与质谱鉴定 | 第51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-53页 |
| 3.1 pEASY-E1-cmCOMT1的原核表达与纯化 | 第51-52页 |
| 3.2 pEASY-E1-cmCOMT1的质谱分析 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 第五章 '琯溪蜜柚'cmCOMT1基因启动子的克隆及顺式元件分析 | 第55-63页 |
| 1 材料与方法 | 第55-58页 |
| 1.1 材料 | 第55页 |
| 1.1.1 试验材料 | 第55页 |
| 1.1.2 主要试剂及仪器 | 第55页 |
| 1.2 方法 | 第55-58页 |
| 1.2.1 TaKaRa的Tail-PCR法 | 第55-57页 |
| 1.2.2 目的片段的克隆与回收 | 第57页 |
| 1.2.3 生物信息学分析 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-61页 |
| 2.1 cmCOMT1基因启动子PCR扩增 | 第58-59页 |
| 2.1.1 cmCOMT1基因5'端调控序列的获得 | 第58页 |
| 2.1.2 cmCOMT1基因5'端调控序列的分析 | 第58-59页 |
| 2.2 '琯溪蜜柚'cmCOMT1基因上游序列顺式元件的功能预测 | 第59-61页 |
| 3 讨论 | 第61-63页 |
| 小结与展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 附录一 琯溪蜜柚中克隆的3条cmCOMT基因cDNA序列 | 第69-71页 |
| 附录二 琯溪蜜柚中克隆的cmCOMT基因DNA序列 | 第71-76页 |
| 附录三 不同粒化程度的琯溪蜜柚汁胞图 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
