| 论文创新点 | 第5-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| ABSTACT | 第13-14页 |
| 第一部分 研究背景和基础 | 第15-41页 |
| 第一章 肠道病毒71型 | 第15-26页 |
| 1.1 EV71病原学特征 | 第16-23页 |
| 1.1.1 人类肠道病毒分类 | 第16页 |
| 1.1.2 EV71结构及理化性质 | 第16-17页 |
| 1.1.3 EV71基因组结构 | 第17页 |
| 1.1.4 EV71基因型分型 | 第17-18页 |
| 1.1.5 EV71生命周期与相关调控机制 | 第18-23页 |
| 1.2 EV71感染途径和致病机理 | 第23-24页 |
| 1.2.1 EV71的传播途径 | 第23页 |
| 1.2.2 EV71的潜在致病机制 | 第23-24页 |
| 1.3 临床症状与检测技术 | 第24-26页 |
| 1.3.1 临床症状 | 第24页 |
| 1.3.2 EV71检测技术 | 第24-26页 |
| 第二章 沉默信息调节因子1 (SIRT1)简介 | 第26-41页 |
| 2.1 SIRT1的结构与去乙酰化反应机理 | 第26-27页 |
| 2.2 SIRT1的分布 | 第27-28页 |
| 2.3 SIRT1的生物学功能 | 第28-37页 |
| 2.3.1 SIRT1参与能量代谢 | 第28-29页 |
| 2.3.2 SIRT1对炎症的抑制作用 | 第29-31页 |
| 2.3.3 SIRT1与细胞凋亡 | 第31-33页 |
| 2.3.4 SIRT1参与神经系统发育分化 | 第33-34页 |
| 2.3.5 SIRT1与肿瘤发育 | 第34-35页 |
| 2.3.6 SIRT1其他功能 | 第35-37页 |
| 2.4 SIRT1与病毒的关系 | 第37-41页 |
| 2.4.1 SIRT1与HIV | 第37-38页 |
| 2.4.2 SIRT1与HBV | 第38-39页 |
| 2.4.3 SIRT1与HCV | 第39-41页 |
| 第二部分 研究内容 | 第41-89页 |
| 第三章 EV71对SIRT1表达的调控作用 | 第42-53页 |
| 3.1 前言 | 第42页 |
| 3.2 实验材料 | 第42-43页 |
| 3.2.1 病毒 | 第42页 |
| 3.2.2 细胞 | 第42页 |
| 3.2.3 引物 | 第42页 |
| 3.2.4 培养基、试剂及药品 | 第42-43页 |
| 3.2.5 设备仪器 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-50页 |
| 3.3.1 哺乳动物细胞的培养 | 第43-44页 |
| 3.3.2 病毒的扩增方法 | 第44-45页 |
| 3.3.3 EV71病毒滴度的测定 | 第45页 |
| 3.3.4 Trizol法提取细胞总RNA | 第45-46页 |
| 3.3.5 RNA逆转录 | 第46页 |
| 3.3.6 Real-time PCR反应 | 第46-47页 |
| 3.3.7 western blot检测 | 第47-49页 |
| 3.3.8 核质分离 | 第49页 |
| 3.3.9 免疫荧光 | 第49-50页 |
| 3.4 实验结果 | 第50-52页 |
| 3.4.1 EV71调控SIRT1表达 | 第50页 |
| 3.4.2 EV71对SIRT1细胞定位的改变 | 第50-52页 |
| 3.5 结果讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 EV71提高SIRT1 sumo化水平 | 第53-60页 |
| 4.1 前言 | 第53页 |
| 4.2 实验材料 | 第53-54页 |
| 4.2.1 病毒 | 第53页 |
| 4.2.2 细胞 | 第53页 |
| 4.2.3 质粒 | 第53页 |
| 4.2.4 培养基、试剂及药品 | 第53-54页 |
| 4.2.5 设备仪器 | 第54页 |
| 4.3 实验方法 | 第54-55页 |
| 4.3.1 哺乳动物细胞的培养 | 第54页 |
| 4.3.2 病毒的扩增 | 第54页 |
| 4.3.3 western blot检测 | 第54页 |
| 4.3.4 核质分离 | 第54页 |
| 4.3.5 免疫沉淀 | 第54-55页 |
| 4.3.6 细胞转染 | 第55页 |
| 4.4 实验结果 | 第55-58页 |
| 4.4.1 细胞中SIRT1的sumo-1化 | 第55-56页 |
| 4.4.2 EV71感染对SIRT1的sumo化水平的影响 | 第56-58页 |
| 4.4.3 EV71引起sumo-SIRT1发生核质定位转移 | 第58页 |
| 4.5 结果讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 SIRT1与EV71 5'UTR的特异性结合 | 第60-66页 |
| 5.1 前言 | 第60页 |
| 5.2 实验材料 | 第60-61页 |
| 5.2.1 病毒 | 第60页 |
| 5.2.2 细胞 | 第60页 |
| 5.2.3 引物 | 第60页 |
| 5.2.4 实验试剂 | 第60-61页 |
| 5.2.5 设备仪器 | 第61页 |
| 5.3 实验方法 | 第61-63页 |
| 5.3.1 哺乳动物细胞培养 | 第61页 |
| 5.3.2 病毒扩增 | 第61页 |
| 5.3.3 EV71病毒滴度测定 | 第61-62页 |
| 5.3.4 Trizol法提取细胞总RNA | 第62页 |
| 5.3.5 免疫沉淀及RT-PCR | 第62页 |
| 5.3.6 RNA体外转录实验 | 第62页 |
| 5.3.7 RNA pull-down | 第62-63页 |
| 5.4 实验结果 | 第63-65页 |
| 5.4.1 SIRT1与EV71 5'UTR的特异性结合 | 第63-65页 |
| 5.5 结果讨论 | 第65-66页 |
| 第六章 SIRT1与EV71 5'UTR RNA结合域分析 | 第66-70页 |
| 6.1 前言 | 第66页 |
| 6.2 实验材料、试剂和仪器 | 第66-67页 |
| 6.2.1 细胞 | 第66页 |
| 6.2.2 质粒 | 第66页 |
| 6.2.3 试剂 | 第66-67页 |
| 6.2.4 设备仪器 | 第67页 |
| 6.3 实验方法 | 第67页 |
| 6.3.2 RNA体外转录实验 | 第67页 |
| 6.3.3 western blot | 第67页 |
| 6.4 实验结果 | 第67-70页 |
| 6.4.1 SIRT1与EV71 5'UTR RNA的三叶草和IRES结构的结合 | 第67-70页 |
| 第七章 SIRT1能够结合EV71 3D聚合酶 | 第70-77页 |
| 7.1 前言 | 第70页 |
| 7.2 实验材料 | 第70-71页 |
| 7.2.1 细胞 | 第70页 |
| 7.2.2 质粒 | 第70页 |
| 7.2.3 实验材料 | 第70-71页 |
| 7.2.3 设备仪器 | 第71页 |
| 7.3 实验方法 | 第71-72页 |
| 7.3.1 哺乳动物细胞的培养 | 第71页 |
| 7.3.2 western blot检测 | 第71页 |
| 7.3.3 免疫沉淀 | 第71页 |
| 7.3.4 GST-3D蛋白的纯化 | 第71-72页 |
| 7.3.5 His-SIRT1的纯化 | 第72页 |
| 7.3.6 GST pull-down | 第72页 |
| 7.3.7 免疫荧光实验 | 第72页 |
| 7.4 实验结果 | 第72-76页 |
| 7.4.1 EV71 3D聚合酶与SIRT1相互作用 | 第72-75页 |
| 7.4.2 EV71 3D的96-149位氨基酸是与SIRT1相互作用的重要区域 | 第75-76页 |
| 7.5 结果讨论 | 第76-77页 |
| 第八章 SIRT1对EV71 3D聚合酶活性抑制作用 | 第77-82页 |
| 8.1 前言 | 第77页 |
| 8.2 实验材料 | 第77页 |
| 8.3 实验方法 | 第77-78页 |
| 8.3.1 western blot检测 | 第77-78页 |
| 8.3.2 EV71 3D聚合酶体外RNA延伸活性实验 | 第78页 |
| 8.3.3 GST pull-down | 第78页 |
| 8.3.4 His-H363Y-SIRT1的纯化 | 第78页 |
| 8.4 实验结果 | 第78-80页 |
| 8.4.1 SIRT1能够使EV71 3D聚合酶去乙酰化 | 第78-79页 |
| 8.4.2 SIRT1对EV71 3D聚合酶的RNA延伸活性的抑制 | 第79-80页 |
| 8.5 结果讨论 | 第80-82页 |
| 第九章 SIRT1抑制EV71复制 | 第82-89页 |
| 9.1 前言 | 第82页 |
| 9.2 实验材料 | 第82-83页 |
| 9.2.1 细胞 | 第82页 |
| 9.2.2 实验材料 | 第82-83页 |
| 9.2.3 设备仪器 | 第83页 |
| 9.2.4 siRNA | 第83页 |
| 9.3 实验方法 | 第83-84页 |
| 9.3.1 哺乳动物细胞培养 | 第83页 |
| 9.3.2 western blot检测 | 第83页 |
| 9.3.3 Trizol方法提取细胞总RNA | 第83页 |
| 9.3.4 RNA逆转录 | 第83页 |
| 9.3.5 Real-time PCR反应 | 第83页 |
| 9.3.6 siRNA转染 | 第83-84页 |
| 9.4 实验结果 | 第84-87页 |
| 9.4.1 过量表达SIRT1对EV71复制的影响 | 第84-85页 |
| 9.4.2 细胞质中SIRT1对EV71复制的抑制作用 | 第85-86页 |
| 9.4.3 SIRT1去乙酰化酶活性影响EV71复制水平 | 第86-87页 |
| 9.5 结果讨论 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-99页 |
| 研究生期间发表的论文 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
