| 致谢 | 第4-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一部分 嗜肺军团菌Dot/Icm Ⅳ型分泌系统核心装置组件DotH的结构生物学研究 | 第13-45页 |
| 1 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 嗜肺军团菌 | 第13页 |
| 1.2 嗜肺军团菌的致病机理 | 第13-15页 |
| 1.2.1 进入宿主细胞 | 第13-14页 |
| 1.2.2 LCV形成 | 第14-15页 |
| 1.2.3 离开宿主细胞 | 第15页 |
| 1.3 嗜肺军团菌Dot/Icm Ⅳ型分泌系统 | 第15-19页 |
| 1.3.1 核心跨膜通道 | 第16-18页 |
| 1.3.2 蛋白偶联复合体(Type Ⅳ coupling protein, T4CP) | 第18-19页 |
| 1.4 该研究的目的与意义 | 第19-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-36页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-36页 |
| 2.2.1 试剂配制 | 第22-23页 |
| 2.2.2 分子克隆 | 第23-29页 |
| 2.2.3 蛋白表达与纯化 | 第29-33页 |
| 2.2.4 蛋白结晶与优化 | 第33-36页 |
| 3 结果与讨论 | 第36-45页 |
| 3.1 蛋白表达与纯化 | 第36-41页 |
| 3.1.1 DotH (101-360)和DotH (123-360)的初步表达纯化 | 第36-37页 |
| 3.1.2 SUMO标签的去除 | 第37-38页 |
| 3.1.3 离子交换层析 | 第38-39页 |
| 3.1.4 分子筛纯化 | 第39-41页 |
| 3.2 蛋白结晶和优化 | 第41-43页 |
| 3.2.1 初步筛选 | 第41-42页 |
| 3.2.2 结晶条件优化 | 第42-43页 |
| 3.3 结论 | 第43-45页 |
| 第二部分 病原菌Ⅲ型效应因子在酵母体系中的功能研究 | 第45-75页 |
| 4 引言 | 第45-53页 |
| 4.1 致病菌Ⅲ型分泌系统效应因子 | 第45-48页 |
| 4.1.1 参与细菌对宿主细胞的粘附和入侵过程 | 第46-47页 |
| 4.1.2 参与细菌的胞内定殖过程 | 第47页 |
| 4.1.3 细胞毒性作用 | 第47页 |
| 4.1.4 破坏上皮细胞的紧密连接 | 第47-48页 |
| 4.2 以酵母为模式生物的遗传学筛选体系 | 第48-50页 |
| 4.2.1 酵母遗传学筛选体系的优势 | 第48页 |
| 4.2.2 外源蛋白在酵母细胞中的表达 | 第48-50页 |
| 4.3 酵母生长抑制筛选在效应因子研究中的应用 | 第50-51页 |
| 4.4 本研究的目的和意义 | 第51-53页 |
| 5 材料与方法 | 第53-66页 |
| 5.1 材料 | 第53-54页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第53页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第53-54页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第54页 |
| 5.2 方法 | 第54-66页 |
| 5.2.1 试剂配制 | 第54-56页 |
| 5.2.2 分子克隆 | 第56-61页 |
| 5.2.3 酵母转化与培养 | 第61-63页 |
| 5.2.4 目的蛋白的表达检测 | 第63-66页 |
| 6 结果与讨论 | 第66-75页 |
| 6.1 效应因子HopAD1和CopA在酵母中的异源表达 | 第66-67页 |
| 6.2 HopAD1和CopA对酵母生长影响程度的定量分析 | 第67-68页 |
| 6.3 CopA突变体在酵母中的异源表达 | 第68-70页 |
| 6.4 效应因子VopK和EspV在酵母中的异源表达 | 第70-71页 |
| 6.5 效应因子EspO,BteA,NleA和CP0014在酵母中的异源表达 | 第71-73页 |
| 6.6 结论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-88页 |
| 作者简介和科研成果 | 第88页 |
