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嗜肺军团菌Dot/Icm Ⅳ型分泌系统核心组件DotH的结构生物学研究和病原菌Ⅲ型效应因子在酵母体系中的功能研究

致谢第4-6页
摘要第6-8页
Abstract第8-9页
第一部分 嗜肺军团菌Dot/Icm Ⅳ型分泌系统核心装置组件DotH的结构生物学研究第13-45页
    1 引言第13-21页
        1.1 嗜肺军团菌第13页
        1.2 嗜肺军团菌的致病机理第13-15页
            1.2.1 进入宿主细胞第13-14页
            1.2.2 LCV形成第14-15页
            1.2.3 离开宿主细胞第15页
        1.3 嗜肺军团菌Dot/Icm Ⅳ型分泌系统第15-19页
            1.3.1 核心跨膜通道第16-18页
            1.3.2 蛋白偶联复合体(Type Ⅳ coupling protein, T4CP)第18-19页
        1.4 该研究的目的与意义第19-21页
    2 材料和方法第21-36页
        2.1 材料第21-22页
            2.1.1 实验材料第21页
            2.1.2 实验试剂第21-22页
            2.1.3 实验仪器第22页
        2.2 方法第22-36页
            2.2.1 试剂配制第22-23页
            2.2.2 分子克隆第23-29页
            2.2.3 蛋白表达与纯化第29-33页
            2.2.4 蛋白结晶与优化第33-36页
    3 结果与讨论第36-45页
        3.1 蛋白表达与纯化第36-41页
            3.1.1 DotH (101-360)和DotH (123-360)的初步表达纯化第36-37页
            3.1.2 SUMO标签的去除第37-38页
            3.1.3 离子交换层析第38-39页
            3.1.4 分子筛纯化第39-41页
        3.2 蛋白结晶和优化第41-43页
            3.2.1 初步筛选第41-42页
            3.2.2 结晶条件优化第42-43页
        3.3 结论第43-45页
第二部分 病原菌Ⅲ型效应因子在酵母体系中的功能研究第45-75页
    4 引言第45-53页
        4.1 致病菌Ⅲ型分泌系统效应因子第45-48页
            4.1.1 参与细菌对宿主细胞的粘附和入侵过程第46-47页
            4.1.2 参与细菌的胞内定殖过程第47页
            4.1.3 细胞毒性作用第47页
            4.1.4 破坏上皮细胞的紧密连接第47-48页
        4.2 以酵母为模式生物的遗传学筛选体系第48-50页
            4.2.1 酵母遗传学筛选体系的优势第48页
            4.2.2 外源蛋白在酵母细胞中的表达第48-50页
        4.3 酵母生长抑制筛选在效应因子研究中的应用第50-51页
        4.4 本研究的目的和意义第51-53页
    5 材料与方法第53-66页
        5.1 材料第53-54页
            5.1.1 实验材料第53页
            5.1.2 实验试剂第53-54页
            5.1.3 实验仪器第54页
        5.2 方法第54-66页
            5.2.1 试剂配制第54-56页
            5.2.2 分子克隆第56-61页
            5.2.3 酵母转化与培养第61-63页
            5.2.4 目的蛋白的表达检测第63-66页
    6 结果与讨论第66-75页
        6.1 效应因子HopAD1和CopA在酵母中的异源表达第66-67页
        6.2 HopAD1和CopA对酵母生长影响程度的定量分析第67-68页
        6.3 CopA突变体在酵母中的异源表达第68-70页
        6.4 效应因子VopK和EspV在酵母中的异源表达第70-71页
        6.5 效应因子EspO,BteA,NleA和CP0014在酵母中的异源表达第71-73页
        6.6 结论第73-75页
参考文献第75-88页
作者简介和科研成果第88页

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