| 中文摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 综述部分 | 第13-29页 |
| 1 植物育性 | 第13页 |
| 2 植物不育 | 第13-15页 |
| 2.1 雌性不育 | 第13-14页 |
| 2.2 雄性不育 | 第14-15页 |
| 3 花粉发育 | 第15-19页 |
| 3.1 花粉的发育过程 | 第15-17页 |
| 3.2 花粉发育过程中的基因调控 | 第17-19页 |
| 3.2.1 小孢子发生起始阶段的基因调控 | 第17页 |
| 3.2.2 成熟花粉形成阶段的基因调控 | 第17-18页 |
| 3.2.3 花药开裂、功能性花粉释放阶段的基因调控 | 第18-19页 |
| 4 Mg~(2+)在花粉发育中的作用 | 第19-21页 |
| 4.1 光合作用 | 第19-20页 |
| 4.2 酶的活化剂 | 第20页 |
| 4.3 叶绿体mRNA的稳定性调控 | 第20-21页 |
| 4.4 调节活性氧代谢和氮代谢 | 第21页 |
| 5 Mg~(2+)转运蛋白的研究 | 第21-28页 |
| 5.1 镁离子独特的化学特性 | 第21页 |
| 5.2 镁离子转运体 | 第21-26页 |
| 5.2.1 CorA家族 | 第21-24页 |
| 5.2.2 Mg~(2+)/H~+交换体 | 第24页 |
| 5.2.3 离子通道 | 第24-25页 |
| 5.2.4 P型磷酸酶(P-type phosphatase) | 第25页 |
| 5.2.5 MgtE家族 | 第25-26页 |
| 5.3 新近研究的Mg~(2+)转运体在花粉发育过程中的调控作用 | 第26-28页 |
| 5.3.1 AtMGT9 | 第27页 |
| 5.3.2 AtMGT5 | 第27页 |
| 5.3.3 AtMGT4 | 第27-28页 |
| 6 本研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| 第二章 实验部分 | 第29-75页 |
| 1 实验材料 | 第29-31页 |
| 1.1 植物材料 | 第29页 |
| 1.2 菌株和质粒 | 第29页 |
| 1.3 实验仪器 | 第29-30页 |
| 1.4 酶类和试剂 | 第30-31页 |
| 1.5 培养基 | 第31页 |
| 1.6 生物信息学分析常用的软件及数据库网站 | 第31页 |
| 2 实验方法 | 第31-59页 |
| 2.1 拟南芥的种植培养 | 第31-33页 |
| 2.1.1 拟南芥种子消毒与接种 | 第31-32页 |
| 2.1.2 拟南芥的土壤培养 | 第32页 |
| 2.1.3 拟南芥的水培法 | 第32-33页 |
| 2.2 拟南芥突变体植株的鉴定 | 第33-35页 |
| 2.2.1 拟南芥叶片总基因组的提取 | 第33页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第33-34页 |
| 2.2.3 PCR检测T-DNA插入的突变纯合体 | 第34-35页 |
| 2.2.4 凝胶电泳检测 | 第35页 |
| 2.3 实时荧光定量PCR | 第35-36页 |
| 2.3.1 原理 | 第35页 |
| 2.3.2 实验步骤 | 第35-36页 |
| 2.4 +/tmem165d突变体植株表型分析 | 第36页 |
| 2.5 +/tmem165d突变体植株花粉表型分析 | 第36-37页 |
| 2.6 Hoechst33342分析花粉败育 | 第37-38页 |
| 2.6.1 原理 | 第37页 |
| 2.6.2 实验步骤 | 第37-38页 |
| 2.7 花粉电镜扫描 | 第38-40页 |
| 2.8 花粉管发育 | 第40-41页 |
| 2.9 进化树分析与跨膜结构域预测 | 第41页 |
| 2.10 亚细胞定位 | 第41-48页 |
| 2.10.1 原理 | 第41-42页 |
| 2.10.2 实验步骤 | 第42-48页 |
| 2.11 pTrc99A-TMEM165d表达载体的构建 | 第48-55页 |
| 2.11.1 目的基因cDNA的获得 | 第48-51页 |
| 2.11.2 RT-PCR产物回收与pTrc99A载体的连接 | 第51-52页 |
| 2.11.3 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第52-53页 |
| 2.11.4 转化(热激法) | 第53-54页 |
| 2.11.5 菌落PCR检测转化是否成功 | 第54页 |
| 2.11.6 质粒DNA的提取 | 第54-55页 |
| 2.11.7 质粒的酶切检测 | 第55页 |
| 2.12 MM281的功能互补实验 | 第55-59页 |
| 2.12.1 MM281感受态细胞的制备 | 第55-56页 |
| 2.12.2 重组质粒电转化至MM281 | 第56页 |
| 2.12.3 菌落PCR以及酶切检测 | 第56页 |
| 2.12.4 MM281互补实验过程 | 第56-59页 |
| 3 实验结果 | 第59-75页 |
| 3.1 拟南芥中存在一类高度保守的TMEM165家族 | 第59-60页 |
| 3.2 突变体植株tmem165c的鉴定 | 第60-61页 |
| 3.3 TMEM165c的组织定位和亚细胞定位 | 第61-62页 |
| 3.4 突变体植株+/tmem165d的鉴定 | 第62-63页 |
| 3.5 TMEM165d基因在花中的表达量最高 | 第63-64页 |
| 3.6 +/tmem165d杂合体自交后代遗传分离比 | 第64-65页 |
| 3.7 +/tmem165d植株和WT型植株外观表型没有差异 | 第65-66页 |
| 3.8 +/tmem165d花粉败育 | 第66-67页 |
| 3.9 Hoechst33342分析花粉败育 | 第67-68页 |
| 3.10 花粉电镜扫描 | 第68-70页 |
| 3.11 花粉管发育 | 第70-71页 |
| 3.12 对TMEM165d编码蛋白的跨膜分析 | 第71-72页 |
| 3.13 TMEM165d的亚细胞定位结果 | 第72-73页 |
| 3.14 pTrc99A-TMEM165d的功能互补结果及分析 | 第73-75页 |
| 第三章 结论 | 第75-76页 |
| 第四章 讨论 | 第76-77页 |
| 第五章 展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 附录 | 第82-84页 |
| 攻读硕士学位期间论文(待)发表情况 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
