| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 野蚕重链研究的背景和意义 | 第12-24页 |
| 1.1 引言 | 第12-13页 |
| 1.2 柳蚕(Actias selene) | 第13-14页 |
| 1.3 柞蚕(Antheraea pernyi) | 第14-15页 |
| 1.4 蚕丝的成丝过程 | 第15-16页 |
| 1.5 蚕丝的组成成分 | 第16-19页 |
| 1.5.1 丝心蛋白(Fibroin) | 第16-19页 |
| 1.5.2 丝胶蛋白(Sericin) | 第19页 |
| 1.6 蚕丝形成过程的影响因素 | 第19-20页 |
| 1.7 丝心蛋白重链氨基端结构域的研究现状及意义 | 第20-24页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第24-48页 |
| 2.1 实验材料与仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第24页 |
| 2.1.2 酶与试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第25页 |
| 2.2 生物信息学获取 | 第25-26页 |
| 2.3 基因克隆 | 第26-36页 |
| 2.3.1 引物设计与处理 | 第26-27页 |
| 2.3.2 目的片段扩增 | 第27-29页 |
| 2.3.3 双酶切法构建重组质粒 | 第29-30页 |
| 2.3.4 突变法构建重组质粒 | 第30-31页 |
| 2.3.5 LIC系统构建重组质粒 | 第31-32页 |
| 2.3.6 连接产物转化E.coli感受态细胞Top10 | 第32-33页 |
| 2.3.7 重组质粒鉴定 | 第33-36页 |
| 2.4 柳蚕重链N末端各版本的表达与纯化 | 第36-44页 |
| 2.4.1 靶蛋白的表达检测与鉴定 | 第36-38页 |
| 2.4.2 靶蛋白的大量表达 | 第38-39页 |
| 2.4.3 靶蛋白的分离纯化 | 第39-42页 |
| 2.4.4 靶蛋白的浓缩与浓度估测 | 第42页 |
| 2.4.5 靶蛋白均一性鉴定：动态光散射(DLS) | 第42-43页 |
| 2.4.6 靶蛋白二级结构预测：圆二色光谱(CD) | 第43-44页 |
| 2.5 核磁共振实验方法解析蛋白质的三维结构 | 第44-48页 |
| 2.5.1 核磁样品制备 | 第44-45页 |
| 2.5.2 靶蛋白的2D ~H-~(15)N HSQC分析 | 第45页 |
| 2.5.3 靶蛋白的主链认证 | 第45-46页 |
| 2.5.4 靶蛋白的侧链指认 | 第46-47页 |
| 2.5.5 靶蛋白二级结构的预测 | 第47-48页 |
| 第3章 柳蚕重链N端结构域的结构功能研究 | 第48-68页 |
| 3.1 AsFibHN(19-273)各截短版的分子克隆 | 第48-54页 |
| 3.1.1 AsFibHN(19-273)各截短版的生物学信息分析 | 第49-51页 |
| 3.1.2 AsFibHN(19-273)各截短版的引物设计 | 第51-52页 |
| 3.1.3 AsFibHN(19-273)各截短版的克隆结果与分析 | 第52-54页 |
| 3.2 AsFibHN(19-273)各截短的晶体学探索 | 第54-59页 |
| 3.2.1 AsFibHN(19-273)的晶体学探索 | 第54-56页 |
| 3.2.2 AsFibHN(19-273)各截短版的纯化和晶体学研究 | 第56-59页 |
| 3.3 AsFibHN(19-105)的核磁学研究 | 第59-65页 |
| 3.3.1 NMR研究的最适缓冲体系摸索 | 第60页 |
| 3.3.2 AsFibHN(19-105)蛋白的稳定性测试 | 第60-61页 |
| 3.3.3 AsFibHN(19-105)蛋白的二维谱分析：2D ~H-~(15)N HSQC | 第61-62页 |
| 3.3.4 AsFibHN(19-105)蛋白的主链认证 | 第62-64页 |
| 3.3.5 AsFibHN(19-105)蛋白的二级结构预测 | 第64-65页 |
| 3.4 总结 | 第65-68页 |
| 第4章 柞蚕重链N/C端组合结构域的结构功能研究 | 第68-72页 |
| 4.1 柞蚕重链N/C端组合结构域的选取 | 第68页 |
| 4.2 ApFibH N/C组合结构域的实验结果 | 第68-71页 |
| 4.2.1 ApFibH N/C蛋白生物学信息分析 | 第69-70页 |
| 4.2.2 ApFibH N/C蛋白的表达纯化和晶体学研究 | 第70-71页 |
| 4.3 总结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
