| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 研究背景及研究意义 | 第11-13页 |
| 1.2 农业土壤及农作物中PAEs研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 非特异性脂转移蛋白研究进展 | 第14-19页 |
| 1.3.1 植物非特异性脂转移蛋白的分类 | 第15-16页 |
| 1.3.2 非特异性脂转移蛋白的结构 | 第16-17页 |
| 1.3.3 植物非特异性脂转移蛋白的脂质结合和转移活性 | 第17-18页 |
| 1.3.4 植物非特异性脂转移蛋白的其他功能 | 第18-19页 |
| 1.4 主要研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 菜心nsLTP基因的全长克隆及其蛋白结构预测 | 第20-33页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第20-24页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.1.2 试剂及仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.3 RNA提取 | 第21-22页 |
| 2.1.4 nsLTP基因全长克隆 | 第22-23页 |
| 2.1.5 nsLTP基因测序序列分析及其蛋白结构预测分析 | 第23-24页 |
| 2.2 结果与分析 | 第24-31页 |
| 2.2.1 总RNA分析 | 第24页 |
| 2.2.2 nsLTP基因全长克隆 | 第24-25页 |
| 2.2.3 nsLTP基因序列分析 | 第25页 |
| 2.2.4 nsLTP蛋白氨基酸序列分析 | 第25页 |
| 2.2.5 nsLTP蛋白氨基酸序列多重比对及进化树分析 | 第25-27页 |
| 2.2.6 nsLTP蛋白疏水性分析 | 第27-28页 |
| 2.2.7 nsLTP蛋白信号肽及跨膜结构预测 | 第28-29页 |
| 2.2.8 nsLTP蛋白磷酸化位点预测 | 第29-30页 |
| 2.2.9 nsLTP蛋白二级结构预测 | 第30页 |
| 2.2.10 nsLTP蛋白三级结构预测 | 第30-31页 |
| 2.3 讨论 | 第31-32页 |
| 2.4 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 重组质粒pET-32a-nsLTP的诱导表达及蛋白纯化验证 | 第33-49页 |
| 3.1 实验材料和方法 | 第33-35页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.1.2 试剂及仪器 | 第34页 |
| 3.1.3 溶液配制 | 第34-35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-42页 |
| 3.2.1 菜心RNA提取 | 第35页 |
| 3.2.2 cDNA第一链的合成 | 第35-36页 |
| 3.2.3 目的基因nsLTP克隆 | 第36-37页 |
| 3.2.4 pET-32a(+)质粒提取 | 第37-38页 |
| 3.2.5 构建原核表达载体 | 第38页 |
| 3.2.6 重组质粒转化宿主菌BL21 (DE3) | 第38-39页 |
| 3.2.7 重组质粒菌落PCR验证验证 | 第39页 |
| 3.2.8 重组质粒小量诱导表达及蛋白检测 | 第39-41页 |
| 3.2.9 重组蛋白提取纯化 | 第41页 |
| 3.2.10 重组蛋白的WB检测 | 第41-42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-46页 |
| 3.3.1 重组质粒菌落PCR鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3.2 重组质粒诱导表达及融合蛋白的可溶性分析 | 第43-44页 |
| 3.3.3 诱导条件的优化 | 第44-45页 |
| 3.3.4 重组质粒诱导表达蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| 3.3.5 重组蛋白WB检测 | 第46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-47页 |
| 3.5 小结 | 第47-49页 |
| 第四章 nsLTP的亚细胞定位 | 第49-55页 |
| 4.1 实验材料和方法 | 第49-51页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第49页 |
| 4.1.2 实验试剂和仪器 | 第49页 |
| 4.1.3 构建亚细胞定位载体 | 第49-50页 |
| 4.1.4 重组质粒转化农杆菌EHA105感受态细胞 | 第50-51页 |
| 4.1.5 农杆菌介导转化洋葱表皮细胞 | 第51页 |
| 4.2 实验结果与分析 | 第51-53页 |
| 4.2.1 亚细胞定位载体构建 | 第51-52页 |
| 4.2.2 pBI-121-GFP-nsLTP融合蛋白亚细胞定位 | 第52-53页 |
| 4.3 讨论 | 第53-54页 |
| 4.4 小结 | 第54-55页 |
| 第五章 nsLTP蛋白分子对接模拟结合 | 第55-59页 |
| 5.1 对接模拟方法 | 第55页 |
| 5.2 结果与分析 | 第55-57页 |
| 5.3 讨论 | 第57-58页 |
| 5.4 小结 | 第58-59页 |
| 第六章 结论与展望 | 第59-61页 |
| 6.1 结论 | 第59-60页 |
| 6.2 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 缩略词表 | 第71-72页 |
| 攻读硕士期间论文发表情况 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
