| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 引言 | 第11-17页 |
| 1 实验材料 | 第17-21页 |
| 1.1 工具酶及分子量MARKER | 第17页 |
| 1.1.1 限.制性内.切酶 | 第17页 |
| 1.1.2 其它酶制剂 | 第17页 |
| 1.1.3 DNA分子量标准 | 第17页 |
| 1.1.4 蛋.白分.子量标.准 | 第17页 |
| 1.1.5 SuperscriptTM III | 第17页 |
| 1.2 主要生化试剂 | 第17-18页 |
| 1.3 培养基、血清 | 第18页 |
| 1.4 菌株 | 第18页 |
| 1.5 质粒 | 第18-19页 |
| 1.6 细胞系 | 第19页 |
| 1.7 生物信息学分析软件 | 第19页 |
| 1.8 主要仪器及设备 | 第19-21页 |
| 2 实验方法 | 第21-33页 |
| 2.1 主要试剂及配制方法 | 第21-23页 |
| 2.1.1 细胞培养及检测所需试剂 | 第21页 |
| 2.1.2 细菌培养所需试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 琼.脂糖凝.胶电.泳试.剂的配.制 2 | 第21-22页 |
| 2.1.4 Western Blot所用试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 细胞学实验 | 第23-26页 |
| 2.2.1 细胞系的培养 | 第23页 |
| 2.2.2 细胞系的转染 | 第23-24页 |
| 2.2.3 细胞毒性实验检测 | 第24页 |
| 2.2.4 细胞增殖实验 | 第24-25页 |
| 2.2.5 细胞划痕实验检测 | 第25页 |
| 2.2.6 细胞侵袭实验 | 第25页 |
| 2.2.7 细胞迁移实验 | 第25-26页 |
| 2.3 REAL-TIME PCR | 第26-28页 |
| 2.3.1 TRIZOl法提取细胞总RNA | 第26页 |
| 2.3.2 RNA质量的检测 | 第26页 |
| 2.3.3 miRNA的cDNA第一链的合成 | 第26-27页 |
| 2.3.4 Real-time PCR | 第27-28页 |
| 2.3.5 PCR反应 | 第28页 |
| 2.4 重组质粒的构建 | 第28-29页 |
| 2.4.1 慢病毒质粒pMIRAN1-21的构建 | 第28-29页 |
| 2.5 质粒DNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.5.1 质粒DNA的大量制备及纯化 | 第29-30页 |
| 2.6 慢病毒的包装 | 第30-32页 |
| 2.6.1 慢病毒的包装和收获 | 第30-31页 |
| 2.6.2 慢病毒的浓缩 | 第31页 |
| 2.6.3 慢病毒的滴度测定 | 第31页 |
| 2.6.4 慢病毒感染目的细胞 | 第31-32页 |
| 2.7 WESTERN BLOT | 第32-33页 |
| 2.7.1 蛋白的提取及定量 | 第32页 |
| 2.7.2 蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第32页 |
| 2.7.3 蛋白的电转移 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-43页 |
| 3.1 耐药细胞中MIRNA表达的检测 | 第33-34页 |
| 3.1.1 耐药细胞株的筛选和 5-FU耐受性检测 | 第33页 |
| 3.1.2 miR-21与胰腺癌耐药相关 | 第33-34页 |
| 3.2 MIR-21的功能检测 | 第34-37页 |
| 3.2.1 miR-21对胰腺癌细胞 耐药的影响 | 第35页 |
| 3.2.2 miR-21促进胰腺癌细胞的增殖 | 第35-36页 |
| 3.2.3 miR-21促进胰腺癌细胞的侵袭 | 第36-37页 |
| 3.2.4 miR-21促进胰腺癌细胞的迁移 | 第37页 |
| 3.3 MIR-21促进 5-FU耐药的机制 | 第37-43页 |
| 3.3.1 miR-21通过直接靶向PTEN来介导胰腺癌细胞对 5-FU的药物耐受 | 第37-40页 |
| 3.3.2 miR-21通过直接靶向PDCD4来介导胰腺癌细胞对 5-FU的药物耐受 | 第40-43页 |
| 4 结论 | 第43-45页 |
| 5 讨论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 致谢 | 第51-53页 |
| 综述 | 第53-60页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 攻读硕士期间发表和待发表的学术论文 | 第60-61页 |
