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重组人前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)蛋白在真核细胞的表达及其抗体的制备

摘要第5-7页
ABSTRACT第7-8页
缩略词表第12-14页
第一章 绪论第14-35页
    1.1 高胆固醇血症第14-16页
        1.1.1 胆固醇代谢第14页
        1.1.2 高胆固醇血症与家族性高胆固醇血症概述第14-15页
        1.1.3 家族性高胆固醇血症的治疗第15-16页
    1.2 PCSK9研究现状第16-27页
        1.2.1 PCSK9的发现与结构第16-17页
        1.2.2 PCSK9与高胆固醇血症第17-18页
        1.2.3 降血脂药物概述第18-27页
    1.3 纳米抗体概述第27-33页
        1.3.1 抗体技术发展概况第28-31页
        1.3.2 纳米抗体的研究进展第31-33页
    1.4 研究目的、意义和内容第33-34页
    1.5 技术路线第34-35页
第二章 PCSK9真核表达载体的构建第35-45页
    2.1 引言第35页
    2.2 实验材料第35-39页
        2.2.1 PCSK9基因设计和合成第35-36页
        2.2.2 载体质粒、菌种第36页
        2.2.3 实验试剂、材料第36-37页
        2.2.4 各种溶液的配制第37-38页
        2.2.5 仪器第38-39页
    2.3 实验方法第39-43页
        2.3.1 质粒的构建第39页
        2.3.2 大肠杆菌DH5α感受态的制备第39页
        2.3.3 质粒的转化第39-40页
        2.3.4 PCSK9-p PICZαA和PCSK9-pc DNA4.0 质粒的中量制备与鉴定第40-42页
        2.3.5 PCSK9-p PICZαA和PCSK9-pc DNA4.0 质粒的大量制备第42-43页
    2.4 结果分析与讨论第43页
    2.5 本章小结第43-45页
第三章 PCSK9蛋白的表达与纯化第45-63页
    3.1 引言第45-46页
    3.2 实验材料第46-51页
        3.2.1 菌种、细胞株第46页
        3.2.2 实验试剂、材料第46页
        3.2.3 各种溶液的配制第46-50页
        3.2.4 仪器第50-51页
        3.2.5 PCR引物第51页
    3.3 实验方法第51-57页
        3.3.1 毕赤酵母细胞GS115表达PCSK9蛋白第51-54页
        3.3.2 悬浮CHO-s细胞表达PCSK9蛋白第54-55页
        3.3.3 重组蛋白纯化与鉴定第55-56页
        3.3.4 PCSK9蛋白活性检测第56-57页
    3.4 结果分析与讨论第57-62页
        3.4.1 线性化PCSK9-p PICZαA第57-58页
        3.4.2 PCR筛选酵母菌阳性克隆第58页
        3.4.3 毕赤酵母细胞表达PCSK9重组蛋白的纯化与鉴定第58-59页
        3.4.4 悬浮CHO-s细胞表达PCSK9重组蛋白的纯化与鉴定第59-61页
        3.4.5 PCSK9蛋白活性检测第61-62页
    3.5 本章小结第62-63页
第四章 PCSK9抗体的制备第63-73页
    4.1 引言第63页
    4.2 实验材料第63-65页
        4.2.1 实验动物第63页
        4.2.2 实验试剂、材料第63-64页
        4.2.3 各种溶液的配制第64-65页
        4.2.4 实验仪器第65页
    4.3 实验方法第65-69页
        4.3.1 制备重链PCSK9抗体第65-67页
        4.3.2 制备鼠抗PCSK9抗体第67-69页
    4.4 结果分析与讨论第69-72页
    4.5 本章小结第72-73页
结论与展望第73-74页
参考文献第74-98页
攻读硕士学位期间取得的研究成果第98-99页
致谢第99-100页
附件第100页

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