| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-35页 |
| 1.1 高胆固醇血症 | 第14-16页 |
| 1.1.1 胆固醇代谢 | 第14页 |
| 1.1.2 高胆固醇血症与家族性高胆固醇血症概述 | 第14-15页 |
| 1.1.3 家族性高胆固醇血症的治疗 | 第15-16页 |
| 1.2 PCSK9研究现状 | 第16-27页 |
| 1.2.1 PCSK9的发现与结构 | 第16-17页 |
| 1.2.2 PCSK9与高胆固醇血症 | 第17-18页 |
| 1.2.3 降血脂药物概述 | 第18-27页 |
| 1.3 纳米抗体概述 | 第27-33页 |
| 1.3.1 抗体技术发展概况 | 第28-31页 |
| 1.3.2 纳米抗体的研究进展 | 第31-33页 |
| 1.4 研究目的、意义和内容 | 第33-34页 |
| 1.5 技术路线 | 第34-35页 |
| 第二章 PCSK9真核表达载体的构建 | 第35-45页 |
| 2.1 引言 | 第35页 |
| 2.2 实验材料 | 第35-39页 |
| 2.2.1 PCSK9基因设计和合成 | 第35-36页 |
| 2.2.2 载体质粒、菌种 | 第36页 |
| 2.2.3 实验试剂、材料 | 第36-37页 |
| 2.2.4 各种溶液的配制 | 第37-38页 |
| 2.2.5 仪器 | 第38-39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-43页 |
| 2.3.1 质粒的构建 | 第39页 |
| 2.3.2 大肠杆菌DH5α感受态的制备 | 第39页 |
| 2.3.3 质粒的转化 | 第39-40页 |
| 2.3.4 PCSK9-p PICZαA和PCSK9-pc DNA4.0 质粒的中量制备与鉴定 | 第40-42页 |
| 2.3.5 PCSK9-p PICZαA和PCSK9-pc DNA4.0 质粒的大量制备 | 第42-43页 |
| 2.4 结果分析与讨论 | 第43页 |
| 2.5 本章小结 | 第43-45页 |
| 第三章 PCSK9蛋白的表达与纯化 | 第45-63页 |
| 3.1 引言 | 第45-46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-51页 |
| 3.2.1 菌种、细胞株 | 第46页 |
| 3.2.2 实验试剂、材料 | 第46页 |
| 3.2.3 各种溶液的配制 | 第46-50页 |
| 3.2.4 仪器 | 第50-51页 |
| 3.2.5 PCR引物 | 第51页 |
| 3.3 实验方法 | 第51-57页 |
| 3.3.1 毕赤酵母细胞GS115表达PCSK9蛋白 | 第51-54页 |
| 3.3.2 悬浮CHO-s细胞表达PCSK9蛋白 | 第54-55页 |
| 3.3.3 重组蛋白纯化与鉴定 | 第55-56页 |
| 3.3.4 PCSK9蛋白活性检测 | 第56-57页 |
| 3.4 结果分析与讨论 | 第57-62页 |
| 3.4.1 线性化PCSK9-p PICZαA | 第57-58页 |
| 3.4.2 PCR筛选酵母菌阳性克隆 | 第58页 |
| 3.4.3 毕赤酵母细胞表达PCSK9重组蛋白的纯化与鉴定 | 第58-59页 |
| 3.4.4 悬浮CHO-s细胞表达PCSK9重组蛋白的纯化与鉴定 | 第59-61页 |
| 3.4.5 PCSK9蛋白活性检测 | 第61-62页 |
| 3.5 本章小结 | 第62-63页 |
| 第四章 PCSK9抗体的制备 | 第63-73页 |
| 4.1 引言 | 第63页 |
| 4.2 实验材料 | 第63-65页 |
| 4.2.1 实验动物 | 第63页 |
| 4.2.2 实验试剂、材料 | 第63-64页 |
| 4.2.3 各种溶液的配制 | 第64-65页 |
| 4.2.4 实验仪器 | 第65页 |
| 4.3 实验方法 | 第65-69页 |
| 4.3.1 制备重链PCSK9抗体 | 第65-67页 |
| 4.3.2 制备鼠抗PCSK9抗体 | 第67-69页 |
| 4.4 结果分析与讨论 | 第69-72页 |
| 4.5 本章小结 | 第72-73页 |
| 结论与展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-98页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 附件 | 第100页 |
