| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| ABBREVIATIONS | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-39页 |
| 1.1 拟南芥雄配子体的发育过程及其遗传调控机制 | 第14-21页 |
| 1.1.1 拟南芥雄配子体的形成与发育 | 第14-16页 |
| 1.1.2 拟南芥花药早期发育的遗传调控机制 | 第16-18页 |
| 1.1.3 拟南芥雄配子体减数分裂过程的调控 | 第18-19页 |
| 1.1.4 拟南芥雄配子体第一次不对称有丝分裂过程的调控 | 第19页 |
| 1.1.5 拟南芥雄配子体第二次有丝分裂过程的调控 | 第19-21页 |
| 1.2 拟南芥雌配子体的发育过程及其遗传调控机制 | 第21-24页 |
| 1.2.1 拟南芥雌配子体的形成与发育 | 第21-22页 |
| 1.2.2 拟南芥雌配子体早期发育的调控机制 | 第22-23页 |
| 1.2.3 拟南芥雌配子体有丝分裂过程的调控 | 第23-24页 |
| 1.2.4 拟南芥雌配子体细胞化过程与细胞命运的决定 | 第24页 |
| 1.3 拟南芥双受精过程 | 第24-32页 |
| 1.3.1 助细胞对花粉管的引导 | 第25-28页 |
| 1.3.2 中央细胞和卵细胞对花粉管的引导 | 第28页 |
| 1.3.3 引导肽对于花粉管生长方向的影响 | 第28-32页 |
| 1.4 超敏反应蛋白结构特点及功能机制 | 第32-36页 |
| 1.4.1 SPFH结构域蛋白的特点 | 第32-33页 |
| 1.4.2 SPFH结构域蛋白的功能 | 第33-35页 |
| 1.4.3 HIR家族蛋白研究进展 | 第35-36页 |
| 1.5 立题依据和研究意义 | 第36-39页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第39-59页 |
| 2.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第39页 |
| 2.1.2 菌株 | 第39页 |
| 2.1.3 质粒载体 | 第39页 |
| 2.1.4 工具酶、常用试剂以及试剂盒 | 第39-40页 |
| 2.2 实验仪器 | 第40页 |
| 2.3 常用培养基及常用试剂的配置 | 第40-45页 |
| 2.3.1 常用培养基的配置 | 第40-43页 |
| 2.3.2 常用试剂的配置 | 第43-45页 |
| 2.4 实验方法 | 第45-59页 |
| 2.4.1 拟南芥的种植与管理 | 第45-46页 |
| 2.4.2 Edwards法提取拟南芥基因组DNA | 第46页 |
| 2.4.3 TRIzoL法提取拟南芥RNA | 第46页 |
| 2.4.4 CTAB法提取拟南芥长角果RNA | 第46-47页 |
| 2.4.5 RNA的反转录 | 第47页 |
| 2.4.6 Real-time PCR | 第47-48页 |
| 2.4.7 目的基因的克隆 | 第48-49页 |
| 2.4.8 PCR产物的胶回收 | 第49页 |
| 2.4.9 DNA片段的连接 | 第49-50页 |
| 2.4.10 大肠杆菌感受态的制备 | 第50页 |
| 2.4.11 大肠杆菌的热激转化 | 第50页 |
| 2.4.12 重组质粒的鉴定 | 第50-51页 |
| 2.4.13 试剂盒法提取大肠杆菌质粒DNA | 第51页 |
| 2.4.14 农杆菌感受态的制备 | 第51-52页 |
| 2.4.15 借助农杆菌的转基因植株的构建 | 第52页 |
| 2.4.16 GUS染色 | 第52页 |
| 2.4.17 亚历山大染色 | 第52-53页 |
| 2.4.18 DAPI染色 | 第53页 |
| 2.4.19 拟南芥花粉的扫描电镜观察 | 第53页 |
| 2.4.20 苯胺蓝染色 | 第53-54页 |
| 2.4.21 拟南芥雌配子体核型分析 | 第54页 |
| 2.4.22 免疫沉淀(IP-MS) | 第54-55页 |
| 2.4.23 酵母感受态细胞制备及转化(Y2H) | 第55页 |
| 2.4.24 双分子荧光互补实验(BiFC) | 第55-56页 |
| 2.4.25 荧光素酶互补成像实验(LCI) | 第56页 |
| 2.4.26 拟南芥CRISPR/Cas9基因打靶技术 | 第56-59页 |
| 第三章 通用转录因子AtTFIIB1下游基因的鉴定 | 第59-69页 |
| 3.1 attfiib1突变体影响花粉管在体内的生长 | 第59页 |
| 3.2 转录因子AtTFIIB1下游基因的筛选与分类 | 第59-61页 |
| 3.3 基因芯片数据的验证 | 第61-64页 |
| 3.4 转录因子AtTFIIB1下游基因突变体的鉴定 | 第64-66页 |
| 3.5 HIR家族蛋白以及RIN4家族蛋白的瞬时表达定位 | 第66-69页 |
| 第四章 hir突变体的鉴定及HIR基因的功能分析 | 第69-96页 |
| 4.0 HIR家族基因的同源性分析 | 第69-72页 |
| 4.1 HIR家族基因的表达模式分析 | 第72-74页 |
| 4.2 HIR家族蛋白的亚细胞定位 | 第74-77页 |
| 4.3 hir1/+突变体的分析 | 第77-85页 |
| 4.3.1 杂合型hir1/+突变体角果短的育性下降 | 第77-79页 |
| 4.3.2 hir1/+突变体植株的雄配子体发育异常 | 第79-80页 |
| 4.3.3 hir1/+突变体植株的雌配子体发育异常 | 第80-81页 |
| 4.3.4 hir1/+突变体植株胚珠的受精比例下降 | 第81页 |
| 4.3.5 HIR家族基因过表达植株的表型观察 | 第81-82页 |
| 4.3.6 hir1 hir2双突变体的遗传分析 | 第82-85页 |
| 4.4 HIR家族蛋白功能的初步探究 | 第85-91页 |
| 4.4.1 HIR1、HIR2和HIR4互作蛋白的筛选 | 第85-86页 |
| 4.4.2 HIR家族蛋白之间的互作关系 | 第86-87页 |
| 4.4.3 HIR1互作蛋白的鉴定 | 第87-89页 |
| 4.4.4 HIR4互作蛋白的鉴定 | 第89-91页 |
| 4.5 rbcs3b/+突变体的鉴定 | 第91-96页 |
| 4.5.1 rbcs3b/+突变体植株的角果短小和育性下降 | 第91-92页 |
| 4.5.2 rbcs3b/+突变体植株的部分雄配子体发育异常 | 第92-93页 |
| 4.5.3 rbcs3b/+突变体植株的雌配子体发育异常 | 第93-95页 |
| 4.5.4 rbcs3b/+突变体植株中胚珠的受精比例下降 | 第95-96页 |
| 第五章 atnop10突变体及相关基因的鉴定 | 第96-104页 |
| 5.1 atnop10-2突变体的分离 | 第96-97页 |
| 5.2 atnop10-2突变体的遗传分析 | 第97页 |
| 5.3 atnop10-2突变体雌配子体表型观察 | 第97-98页 |
| 5.4 atnop10突变体雌配子体的表型统计分析 | 第98-102页 |
| 5.5 AtNOP10蛋白的亚细胞定位 | 第102-104页 |
| 第六章 总结与讨论 | 第104-109页 |
| 6.1 总结 | 第104-105页 |
| 6.1.1 AtTFIIB1可能通过调控下游基因表达在植物生殖发育中起重要作用 | 第104-105页 |
| 6.1.2 AtNOP10在胚囊发育中起重要作用 | 第105页 |
| 6.2 讨论 | 第105-107页 |
| 6.2.1 转录因子AtTFIIB1调控多种与花粉管生长相关基因 | 第105页 |
| 6.2.2 HIR家族蛋白可能与RIN4家族蛋白共同调控花粉管爆裂 | 第105-106页 |
| 6.2.3 hir1是一个杂合体存在表型的突变体 | 第106页 |
| 6.2.4 HIR1与RBCS3B可能共同调控雌雄配子体的发育 | 第106页 |
| 6.2.5 HIR1互作蛋白Lhb1B2的研究进展 | 第106-107页 |
| 6.2.6 HIR1可能与细胞质遗传相关 | 第107页 |
| 6.3 展望 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-123页 |
| 附录 引物列表 | 第123-133页 |
| 表1 参与突变体鉴定相关引物 | 第123-125页 |
| 表2 参与Real-time PCR相关引物 | 第125-126页 |
| 表3 亚细胞定位相关引物 | 第126-128页 |
| 表4 CRISPR/Cas9打靶载体构建相关引物 | 第128-129页 |
| 表5 部分Y2H实验载体构建引物 | 第129-130页 |
| 表6 BiFC实验载体构建引物 | 第130-131页 |
| 表7 LCI实验载体构建引物 | 第131-132页 |
| 表8 atnop10突变体相关引物 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
| 作者简介 | 第134页 |
