| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩略词 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-25页 |
| 1.1 玉米籽粒发育研究进展 | 第11-13页 |
| 1.1.1 玉米籽粒的结构 | 第11页 |
| 1.1.2 玉米胚的生长发育 | 第11-12页 |
| 1.1.3 玉米胚乳的生长发育 | 第12-13页 |
| 1.1.4 玉米籽粒突变体的研究进展 | 第13页 |
| 1.2 图位克隆 | 第13-15页 |
| 1.2.1 图位克隆的原理 | 第13-14页 |
| 1.2.2 图位克隆的技术环节 | 第14-15页 |
| 1.2.3 图位克隆技术在分离植物基因中的应用 | 第15页 |
| 1.3 油菜素内酯 | 第15-18页 |
| 1.3.1 油菜素内酯的合成及信号传导 | 第15-17页 |
| 1.3.2 油菜素内酯在植物生长中的生理作用 | 第17页 |
| 1.3.3 油菜素内酯与籽粒发育的关系 | 第17-18页 |
| 1.4 三角状五肽重复蛋白(Pentatricopeptide repeat proteins,PPR) | 第18-23页 |
| 1.4.1 PPR蛋白家族的分类 | 第18页 |
| 1.4.2 PPR蛋白的分子功能 | 第18-22页 |
| 1.4.3 PPR蛋白与籽粒发育的关系 | 第22-23页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 玉米籽粒突变基因Mn219的图位克隆及基因功能分析 | 第25-69页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-45页 |
| 2.2.1 EMS诱变 | 第26页 |
| 2.2.2 石蜡切片制作 | 第26-28页 |
| 2.2.3 CTAB法提取DNA | 第28页 |
| 2.2.4 碱煮法提取DNA | 第28-29页 |
| 2.2.5 RNA提取(Trizol法提取植物总RNA) | 第29页 |
| 2.2.6 反转录(cDNA第一链合成:promega M-MLV反转录酶) | 第29页 |
| 2.2.7 PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.8 Quantitative Real-time PCR | 第30页 |
| 2.2.9 载体构建 | 第30-32页 |
| 2.2.10 转化农杆菌 | 第32页 |
| 2.2.11 玉米遗传转化 | 第32-33页 |
| 2.2.12 亚细胞定位 | 第33-35页 |
| 2.2.13 组蛋白提取 | 第35页 |
| 2.2.14 Western Blot | 第35-36页 |
| 2.2.15 转录组文库构建 | 第36-41页 |
| 2.2.16 染色质免疫印迹沉淀实验(ChIP) | 第41-44页 |
| 2.2.17 油菜素内酯(BR)处理发芽中的玉米籽粒 | 第44-45页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第45-66页 |
| 2.3.1 突变体mn219的获得 | 第45页 |
| 2.3.2 突变体mn219的表型 | 第45-48页 |
| 2.3.3 Mn219定位群体的构建 | 第48-49页 |
| 2.3.4 Mn219的基因定位 | 第49-52页 |
| 2.3.5 Mn219的候选基因预测及分析 | 第52-55页 |
| 2.3.6 mn219的转基因互补验证 | 第55-58页 |
| 2.3.7 MN219的亚细胞定位 | 第58-60页 |
| 2.3.8 组蛋白乙酰化水平检测 | 第60页 |
| 2.3.9 转录组测序结果分析 | 第60-64页 |
| 2.3.10 染色质免疫印迹沉淀实验(ChIP) | 第64页 |
| 2.3.11 油菜素内酯(BR)处理实验 | 第64-66页 |
| 2.4 讨论 | 第66-67页 |
| 2.4.1 Mn219参与组蛋白乙酰化调控基因表达 | 第66-67页 |
| 2.4.2 Elongator复合体与激素之间的关系 | 第67页 |
| 2.5 结论 | 第67-69页 |
| 第三章 玉米籽粒突变基因Dek39的图位克隆及基因功能分析 | 第69-94页 |
| 3.1 实验材料 | 第69-70页 |
| 3.2 实验方法 | 第70-79页 |
| 3.2.1 DEK39的亚细胞定位 | 第70页 |
| 3.2.2 rRNA去除 | 第70-72页 |
| 3.2.3 文库构建 | 第72-77页 |
| 3.2.4 线粒体提取 | 第77页 |
| 3.2.5 线粒体蛋白提取 | 第77-78页 |
| 3.2.6 非变性胶电泳 | 第78页 |
| 3.2.7 非变性胶染色 | 第78-79页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第79-91页 |
| 3.3.1 突变体dek39的获得 | 第79页 |
| 3.3.2 突变体dek39的表型 | 第79-82页 |
| 3.3.3 Dek39定位群体的构建 | 第82-83页 |
| 3.3.4 Dek39的基因定位 | 第83页 |
| 3.3.5 Dek39的候选基因预测及分析 | 第83-85页 |
| 3.3.6 dek39的转基因互补实验验证 | 第85-87页 |
| 3.3.7 DEK39的亚细胞定位 | 第87页 |
| 3.3.8 dek39转录组测序 | 第87页 |
| 3.3.9 nad3-247和nad3-275编辑效率的实验验证 | 第87-90页 |
| 3.3.10 线粒体复合体I的活性验证 | 第90-91页 |
| 3.4 讨论 | 第91-93页 |
| 3.4.1 DEK39在线粒体和质体中共表达 | 第91页 |
| 3.4.2 nad3的编辑是不保守的 | 第91-92页 |
| 3.4.3 nad3-275编辑的缺失降低而不是完全消除复合体I的活性 | 第92-93页 |
| 3.5 结论 | 第93-94页 |
| 第四章 总结 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-105页 |
| 附录 | 第105页 |
| 附录Ⅰ 文章中用到的部分溶液配方 | 第105-110页 |
| 附录Ⅱ Mn219,Dek39初定位所用引物 | 第110-113页 |
| 附录Ⅲ Mn219所用引物 | 第113-114页 |
| 附录Ⅳ Dek39所用引物 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-117页 |
| 个人简历 | 第117页 |
