| 缩略词表 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 前言 | 第14-19页 |
| 第一章 “GoldenGate”克隆法及利用I-SceI酶切位点构建炭疽芽胞杆菌高效基因敲除体系 | 第19-34页 |
| 1 研究背景 | 第19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-27页 |
| 2.1 菌株与质粒 | 第19-20页 |
| 2.2 本研究所用试剂和仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.3 引物 | 第21-23页 |
| 2.4 目的基因上下游同源片段及壮观霉素抗性基因(Spcr)的PCR扩增 | 第23页 |
| 2.5 三个DNA片段与pGEM-Teasy质粒的连接 | 第23-24页 |
| 2.6 受体质粒pKMBKI的构建 | 第24-25页 |
| 2.7 “GoldenGate”克隆法构建同源重组靶向载体 | 第25-26页 |
| 2.8 A16R菌株中eag基因的敲除 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-30页 |
| 3.1 “GoldenGate”连接后的蓝白斑筛选结果 | 第27-28页 |
| 3.2 重组靶向载体的菌落PCR鉴定 | 第28-29页 |
| 3.3 A16R菌株中eag基因敲除验证 | 第29-30页 |
| 4 讨论 | 第30-32页 |
| 4.1 不同需求下酶的使用 | 第30页 |
| 4.2 DNA片段之间连接的粘性末端序列设计 | 第30-31页 |
| 4.3 缓冲液和体系对连接效率的影响 | 第31页 |
| 4.4 敲除载体的构建体系在其他基因敲除中的应用 | 第31-32页 |
| 5 小结 | 第32-34页 |
| 第二章 炭疽芽胞杆菌B17D2菌株atxA基因功能研究 | 第34-69页 |
| 1 研究背景 | 第34-37页 |
| 2 材料和方法 | 第37-50页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第37-38页 |
| 2.2 本研究所用引物 | 第38-39页 |
| 2.3 仪器设备和试剂 | 第39-41页 |
| 2.4 培养基及试剂配制 | 第41-42页 |
| 2.5 atxA基因敲除载体的构建 | 第42页 |
| 2.6 B17D2△atxA::spc基因缺失突变株的构建 | 第42-45页 |
| 2.7 炭疽芽胞杆菌B17D2△atxA::spc基因缺失突变株与B17D2菌株的蛋白组学研究 | 第45-48页 |
| 2.8 炭疽芽胞杆菌B17D2△atxA::spc基因缺失突变株与B17D2菌株的表达谱基因芯片分析 | 第48-50页 |
| 3 结果 | 第50-65页 |
| 3.1 炭疽芽胞杆菌atxA基因敲除载体pKMUSDA的构建 | 第50-52页 |
| 3.2 炭疽芽胞杆菌atxA基因缺失突变株的构建和验证 | 第52-57页 |
| 3.3 炭疽芽胞杆菌B17D2△atxA::spc基因缺失突变株与B17D2菌株的蛋白组学研究 | 第57-61页 |
| 3.4 炭疽芽胞杆菌B17D2△atxA::spc基因缺失突变株与B17D2菌株的基因芯片研究 | 第61-65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 4.1 atxA基因缺失突变株的构建与验证 | 第65-66页 |
| 4.2 原始株与atxA基因缺失突变株的蛋白表达谱比较 | 第66-67页 |
| 4.3 原始株与atxA基因缺失突变株的基因芯片结果分析 | 第67页 |
| 5 小结 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 附录1 无CO_2条件下B17D2和B17D2△atxA::spc的转录差异基因 | 第73-80页 |
| 附录2 5%CO_2条件下B17D2和B17D2△atxA::spc的转录差异基因 | 第80-84页 |
| 主要简历 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
