| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 中英文索引 | 第12-13页 |
| 1 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 国内外研究现状 | 第13-19页 |
| 1.1.1 慢性阻塞性肺疾病及其流行病学研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.2 慢性阻塞性肺疾病的主要致病因素及病理生理特征 | 第15-16页 |
| 1.1.3 细胞外基质 | 第16-18页 |
| 1.1.4 气道平滑肌细胞 | 第18-19页 |
| 1.2 研究目的、内容及创新性 | 第19-23页 |
| 1.2.1 提出问题和研究意义 | 第19-20页 |
| 1.2.2 研究内容和目的 | 第20-21页 |
| 1.2.3 创新性 | 第21-23页 |
| 2 香烟提取物和转化生长因子-Β1 对慢性阻塞性肺疾病患者气道平滑肌细胞细胞外基质基因表达的影响 | 第23-45页 |
| 2.1 引言 | 第23-24页 |
| 2.2 实验设备、材料与试剂 | 第24-26页 |
| 2.2.1 实验细胞的来源 | 第24页 |
| 2.2.2 主要实验设备与仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.3 主要实验材料与试剂 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法与步骤 | 第26-34页 |
| 2.3.1 人体气道平滑肌细胞的原代培养 | 第26-27页 |
| 2.3.2 气道平滑肌细胞支原体检测 | 第27-28页 |
| 2.3.3 制作香烟提取物 | 第28-29页 |
| 2.3.4 气道平滑肌细胞的培养与刺激 | 第29-30页 |
| 2.3.5 香烟提取物的细胞毒性检测 | 第30-31页 |
| 2.3.6 提取气道平滑肌细胞 RNA 与逆转录 PCR | 第31-32页 |
| 2.3.7 细胞外基质及与细胞粘附相关基因检测 | 第32-34页 |
| 2.3.8 数据处理与统计分析 | 第34页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第34-43页 |
| 2.4.1 人体气道平滑肌细胞的鉴定 | 第34-37页 |
| 2.4.2 香烟提取物的细胞毒性检测结果 | 第37-39页 |
| 2.4.3 细胞外基质基因与细胞粘附相关基因的表达结果 | 第39-43页 |
| 2.5 本章小结 | 第43-45页 |
| 3 香烟提取物和转化生长因子- Β1 对慢性阻塞性肺疾病患者气道平滑肌细胞细胞外基质蛋白表达和细胞行为的影响 | 第45-71页 |
| 3.1 引言 | 第45-46页 |
| 3.2 实验设备与材料 | 第46-48页 |
| 3.2.1 主要实验设备与仪器 | 第46页 |
| 3.2.2 主要实验材料与试剂 | 第46-48页 |
| 3.3 实验方法与步骤 | 第48-56页 |
| 3.3.1 气道平滑肌细胞的培养、刺激与样本采集 | 第48-49页 |
| 3.2.2 趋化因子和白介素酶联免疫吸附实验 | 第49-50页 |
| 3.3.3 基质金属蛋白酶酶联免疫吸附实验 | 第50-52页 |
| 3.3.4 细胞外基质蛋白酶联免疫吸附实验 | 第52-53页 |
| 3.3.5 免疫组织化学染色 | 第53-54页 |
| 3.3.6 细胞粘附实验 | 第54-55页 |
| 3.3.7 伤口修复实验 | 第55-56页 |
| 3.3.8 数据处理与统计分析 | 第56页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第56-69页 |
| 3.4.1 气道平滑肌细胞趋化因子-1、-8 和白介素-6 的表达量 | 第56-59页 |
| 3.4.2 气道平滑肌细胞基质金属蛋白酶-1、-2、-3、-10 和-12 的表达量 | 第59-63页 |
| 3.4.3 气道平滑肌细胞细胞外基质蛋白（纤连蛋白、基底膜蛋白、胶原蛋白-5 和胶原蛋白-8α1）沉积变化 | 第63-66页 |
| 3.4.4 胶原蛋白-8α1 免疫组织化学染色 | 第66-68页 |
| 3.4.5 气道平滑肌细胞粘附和修复功能 | 第68-69页 |
| 3.5 本章小结 | 第69-71页 |
| 4 转化生长因子-Β1 对扣针蛋白-1 和纤连蛋白的基因表达和蛋白分布的影响 | 第71-97页 |
| 4.1 引言 | 第71-72页 |
| 4.2 实验材料与试剂 | 第72-75页 |
| 4.2.1 主要实验设备与仪器 | 第72页 |
| 4.2.2 主要实验材料与试剂 | 第72-75页 |
| 4.3 实验方法与步骤 | 第75-81页 |
| 4.3.1 细胞外基质扣针蛋白-1 和纤连蛋白酶联免疫吸附实验 | 第75-76页 |
| 4.3.2 培养基上清液样本的采集和细胞总蛋白的收集与测量 | 第76-77页 |
| 4.3.3 细胞内扣针蛋白-1、纤连蛋白与可溶型扣针蛋白-1、纤连蛋白蛋白质印迹实验 | 第77-78页 |
| 4.3.4 扣针蛋白-1 和纤连蛋白基因实时 PCR | 第78-79页 |
| 4.3.5 环己酰亚胺细胞存活率检测和抑制新生蛋白合成实验 | 第79-80页 |
| 4.3.6 外源性扣针蛋白-1 添加实验 | 第80页 |
| 4.3.7 数据处理与统计分析 | 第80-81页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第81-94页 |
| 4.4.1 转化生长因子-β1上调细胞外基质扣针蛋白-1 和纤连蛋白 | 第81-82页 |
| 4.4.2 转化生长因子-β1上调胞内扣针蛋白-1 和纤连蛋白 | 第82-85页 |
| 4.4.3 转化生长因子-β1下调可溶型扣针蛋白-1，上调可溶型纤连蛋白 | 第85-86页 |
| 4.4.4 转化生长因子-β1下调扣针蛋白-1 基因表达，上调纤连蛋白基因表达 | 第86-89页 |
| 4.4.5 环己酰亚胺抑制扣针蛋白-1 和纤连蛋白的分泌与沉积 | 第89-93页 |
| 4.4.6 外源性扣针蛋白-1 沉积于细胞外基质 | 第93-94页 |
| 4.6 本章小结 | 第94-97页 |
| 5 结论与展望 | 第97-99页 |
| 5.1 主要总结 | 第97-98页 |
| 5.2 后续工作与展望 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-113页 |
| 附录 | 第113-118页 |
| A TaqMan-Array Human Extracellualr Matrix & Adhesion Molecules 96-well plate | 第113-116页 |
| B 三明治酶联免疫吸附实验所用抗体及浓度 | 第116页 |
| C 细胞外基质蛋白酶联免疫吸附实验所用抗体及浓度 | 第116-117页 |
| D WESTERN BLOT 实验所用抗体及浓度 | 第117页 |
| E 组织染色所用抗体及浓度 | 第117页 |
| F. 作者在攻读博士学位期间发表与提交的科研论文 | 第117页 |
| G 作者在攻读博士学位期间参加的国际会议 | 第117-118页 |
